病理組織包埋染色以及蘇木精 — 伊紅染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ,簡稱HE染色法 ,石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一 。蘇木精染液為堿性 ,主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核酸著紫藍(lán)色 ;伊紅為酸性染料 ,主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色 。HE染色法是組織學(xué)、胚胎學(xué)、病理學(xué)教學(xué)與科研中基本、使用較廣泛的技術(shù)方法。
病理組織包埋染色以及蘇木精 — 伊紅染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ,簡稱HE染色法 ,石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一 。蘇木精染液為堿性 ,主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核酸著紫藍(lán)色 ;伊紅為酸性染料 ,主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色 。HE染色法是組織學(xué)、胚胎學(xué)、病理學(xué)教學(xué)與科研中基本、使用廣泛的技術(shù)方法。
一、常規(guī)病理組織包埋染色/HE染色步驟
1、石蠟切片脫蠟復(fù)水:
(1)二甲苯(Ⅰ) 15min
(2) 二甲苯(Ⅱ) 15 min
(3)二甲苯:無水乙醇=1:1 2min
(4) *乙醇(Ⅰ) 5min
(5) *乙醇(Ⅱ) 5 min
(6) 80%乙醇 5min
(7) 蒸餾水 5 min
2、蘇木精液染色:
(1) 蘇木精液染色 5 min
(2) 水洗10 min 或流水沖洗5 min返藍(lán)
(3) 1%鹽酸乙醇 30s分化
(4) 水洗 30 s
(5)蒸餾水過洗 5 s
3、伊紅液染色
(1) 0.5%伊紅液染色 1-3 min
(2) 蒸餾水稍洗 30 s
4、脫水封片
(1) 80%乙醇稍洗 30 s
(2) 95%乙醇(Ⅰ)1 min
(3) 95%乙醇(Ⅱ) 1 min
(4) 無水乙醇 (Ⅰ)3 min
(5)無水乙醇(Ⅱ)3 min
(6)二甲苯(Ⅰ) 3 min
(7)二甲苯(Ⅱ) 3 min
(8)中性樹膠封固
二、病理組織包埋染色/HE染色結(jié)果的判斷
1、實驗結(jié)果
細(xì)胞核被蘇木精染成鮮明的藍(lán)色,軟骨基質(zhì)、鈣鹽顆粒呈深藍(lán)色,粘液呈灰藍(lán)色。細(xì)胞漿被伊紅染成深淺不同的粉紅色至桃紅色,胞漿內(nèi)嗜酸性顆粒呈反光強(qiáng)的鮮紅色。膠原纖維呈淡粉紅色,彈力纖維呈亮粉紅色,紅血球呈橘紅色,蛋白性液體呈粉紅色。
著色深淺與組織或細(xì)胞的種類有關(guān),也隨其生活周期及病理變化而改變。例如,細(xì)胞在新生時期胞漿對伊紅著色較淡或輕度嗜堿,當(dāng)其衰老時或發(fā)生退行性變則呈現(xiàn)嗜伊紅濃染。膠原纖維在老化和出現(xiàn)透明變性時,伊紅著色由淺變深。
2、病理組織包埋染色/HE染色評定標(biāo)準(zhǔn):
(1)切片完整,厚度4-6微米,厚薄均勻,無皺褶無刀痕;
(2)染色核漿分明,紅藍(lán)適度,透明潔凈,封裱美觀。