6
細(xì)胞遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)
活體細(xì)胞通常都具有一定的遷移能力，不同細(xì)胞的遷移能力不同。與遷移相類似的能力是侵襲，具有裂解細(xì)胞基質(zhì)的能力的細(xì)胞通常具有較強(qiáng)的侵襲能力。大部分腫瘤細(xì)胞的遷移能力較強(qiáng)，這也是反應(yīng)腫瘤細(xì)胞體內(nèi)發(fā)生轉(zhuǎn)移的一個(gè)重要指標(biāo)。通常會先對細(xì)胞的遷移能力進(jìn)行檢測，進(jìn)一步再觀察該細(xì)胞是否具有侵襲能力。在進(jìn)行遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)過程中，我們會選擇多種方法在不同的時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行檢測。綜合判斷某種細(xì)胞的遷移和侵襲能力。
細(xì)胞遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)步驟
一、將小室放入培養(yǎng)板中，在上室加入300 ?l預(yù)溫的無血清培養(yǎng)基，室溫下靜置15－30 min，使基質(zhì)膠再水化。再吸去剩余培養(yǎng)液。
二、制備細(xì)胞懸液
三、接種細(xì)胞
測量外泌體的粒徑分布一直以來都是外泌體表征的重要組成部分。但是由于外泌體的尺寸僅為30~200 nm，所以必須借助一些特殊的檢測手段才能夠?qū)@種在光學(xué)顯微鏡下不可視的顆粒進(jìn)行觀測。本篇就外泌體粒徑測量技術(shù)的發(fā)展進(jìn)行簡述，并對不同技術(shù)的差異進(jìn)行比較。
在外泌體發(fā)現(xiàn)的早期，由于還沒有專門針對這類尺寸顆粒的分析方法，因此直接在電鏡下面觀察粒徑并統(tǒng)計(jì)成為了最早的外泌體粒徑統(tǒng)計(jì)方法。
由于外泌體與材料學(xué)所合成的脂質(zhì)體在形態(tài)上十分相似，因此用于脂質(zhì)體表征的動態(tài)光散射技術(shù)（DLS）便被應(yīng)用于外泌體的尺寸測量上。DLS利用光射到遠(yuǎn)小于其波長的小顆粒上時(shí)會產(chǎn)生瑞利散射現(xiàn)象，通過觀察散射光的強(qiáng)度隨時(shí)間的變化推算出溶液中顆粒的大小。但是這種技術(shù)會受到測量物質(zhì)的顏色、電性、磁性等理化特性的影響，并且對于灰塵和雜質(zhì)十分敏感。因此使得DLS在測量尺寸較小的粒子時(shí)，測量出的粒徑與實(shí)際的分布具有較大的偏差。
為了彌補(bǔ)DLS的短板，納米粒子跟蹤分析（NTA）技術(shù)孕育而生。這種技術(shù)采用激光散射顯微成像技術(shù)，用于記錄納米粒子在溶液中的布朗運(yùn)動軌跡，并通過Stokes-Einstein方程推算粒子大小。這種技術(shù)能夠?qū)?0~1000 nm的粒徑進(jìn)行測量，因此能夠提供更為精確的粒徑數(shù)據(jù)。在諸多文獻(xiàn)的測試中均取得了較DLS更好的精度，因此成為目前最為主流的外泌體尺寸測量手段。
