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當(dāng)前位置:Bio-Techne>>技術(shù)文章>>單細胞鋪板新選擇
傳統(tǒng)的細胞鋪板一般采用手動的有限稀釋法來進行,這種方法在需要的操作簡單,只需要普通的排槍就能實現(xiàn),但是效果卻很不理想。主要體現(xiàn)在:一致性差,有效孔比例低下,耗費時間等。
近年來,單抗藥物的開發(fā)領(lǐng)域又被推上了一個新的高度,越來越多的公司都紛紛投入到這個熱潮當(dāng)中,隨之而來的相關(guān)法規(guī)的要求也是越來越嚴(yán)格。在眾多的要求當(dāng)中,F(xiàn)DA對藥物來源的單克隆源性的要求非常嚴(yán)格,這就要求生產(chǎn)和研發(fā)的企業(yè)在細胞株開發(fā)階段做到嚴(yán)格的單克隆驗證。目前市面上已經(jīng)有幾款孔板掃描設(shè)備能夠得到FDA的認可,他們的數(shù)據(jù)可以用來作為單克隆源性的證明。在這里我們要討論的是在驗證前的分離階段,如何快速、準(zhǔn)確、的獲得單細胞。除了上面提到的有限稀釋法之外,昂貴的流式細胞分選儀也可以用來作為單細胞鋪板工具之一,當(dāng)然流式除了操作復(fù)雜,需要專人維護之外,分選得到的細胞常常復(fù)蘇比例比較低。在流式分選中,細胞的損傷比較大。
Namocell單細胞分離儀為細胞鋪板提供了全新解決方案。該設(shè)備采用*的微流體技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)快速,,準(zhǔn)確的細胞鋪板工作。并且分離過程輕柔,不會影響細胞的后續(xù)生長。能廣泛應(yīng)用于單抗開發(fā)中的CLD環(huán)節(jié),以及單細胞測序等。
Namocell單細胞分離用于細胞鋪板的原理如下:
將細胞通過一次性的芯片上端加樣孔,注入到芯片腔體中。單細胞流在微流控通道中流過激光檢測區(qū)域,機器能對細胞進行識別,去除掉細胞碎片,死細胞以及狀態(tài)較差的細胞,使得終落到孔板中的細胞都具有很好的活性。高速電子閥門能夠捕獲每一個活性細胞,終形成1ul體積的液滴,輕柔地落進孔板中。整個過程對細胞的損傷可以忽略不計,所以分選得到的細胞絕大多數(shù)的細胞都能再次分裂生長。
整個過程非常快速,一般一塊9孔板分選需要1min左右,單個細胞一個孔的比例在85%~90%,一般細胞復(fù)蘇的比例在40%~65%(復(fù)蘇比例跟細胞本身有很大關(guān)系)。
該方式的特點
輕柔分選:鞘液壓力2psi,提高分選細胞活性
靈活分選:可以根據(jù)熒光條件篩選,也可以不染色直接鋪板
無菌分選:一次性芯片,保證樣本之間*隔離;儀器體積小巧,可置于超凈臺中
分選:96孔板分選不到1min,384孔板4min以內(nèi),單克隆率超過95%
輕松分選:儀器操作簡單,無需專人操作維護
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