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目錄:上海貝博生物科技有限公司>>蛋白質(zhì)生物學(xué)>>蛋白提取和裂解>> 精子蛋白提取試劑盒

精子蛋白提取試劑盒
  • 精子蛋白提取試劑盒
參考價 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準
參考價 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準
  • 品牌 貝博生物
  • 型號
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
  • 所在地
屬性

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更新時間:2024-11-24 18:12:17瀏覽次數(shù):88評價

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產(chǎn)品概述 product description 貝博® BBproExtra® 精子總蛋白提取試劑盒提供全套試劑,適用于從各種動物精液樣品中提取總蛋白。本試劑盒含有的配方能夠有效溶解膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物,阻止了蛋白酶對蛋白的降解,為提取高純度的蛋白提供了保證。 本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。 本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白,下游應(yīng)用范圍廣,提取液裂解細胞的能力較溫和,需要根據(jù)實際樣本情況優(yōu)化裂解時間。 本試劑盒中不含有EDTA,與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。
保存溫度
2-8℃
注意事項
1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態(tài),從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時間水浴,變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完!
有效期
一年
檢測方法
WB,IP等
適用樣本
精子
產(chǎn)品特點
1.使用方便,從細胞,組織中提取蛋白不需經(jīng)過研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。
2.提取過程簡單方便,將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。
3.含蛋白穩(wěn)定劑,提取的蛋白穩(wěn)定。
4.紫外檢測蛋白濃度時,背景干擾低。
5.總蛋白提取液含多種有效成分,可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白和膜蛋白,又可結(jié)合釋出的蛋白防止沉淀。
6.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64,每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括蛋白酶、半蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
產(chǎn)品應(yīng)用
WB,IP等
儀器準備
1.離心機
2.振蕩器
3.勻漿機/勻漿器
4.渦旋混勻器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
試劑準備
1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒
耗材準備
1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套
使用注意事項
使用注意事項:
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底,避免開蓋時液體灑落。
? 蛋白酶抑制劑在2-8℃時是固體狀態(tài),從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時間水浴,變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
? 實驗過程中的所有試劑須預(yù)冷;所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀,不影響使用,溶解后正常使用。
? 如果試劑盒不能短時間內(nèi)用完,蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
? 可以根據(jù)自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
? 下游實驗如果是進行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測,提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑,注意提取過程保持低溫操作,縮短離心時間。
使用方法
1. 提取液準備:
每500ul冷的蛋白提取液B中加入2ul蛋白酶抑制劑混合物,混勻后置冰上備用。
2. 取0.5ml-1ml新鮮精液,在室溫或37℃靜置30-60分鐘。
3. 在液化的精液中加入0.5ml提取液A,充分混勻。
4. 在4℃,3000×g條件下離心15分鐘,小心吸取上清,盡可能吸干,留沉淀。
5. 在沉淀中加入500ul冷的蛋白提取液B,吹打混勻后,在4℃條件下振蕩20-40分鐘。
6. 在4℃,12000×g條件下離心5分鐘。
7. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管,即可得到精子總蛋白。
8. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?br>
常見問題分析
1.精子裂解速度慢?
為了充分保證提取得到的蛋白的活性,提取液采用的保護蛋白的配方,裂解能力溫和,下游應(yīng)用范圍廣。適當(dāng)延長裂解的時間即可。

2. 蛋白濃度低?
處理部分樣本時可能沒有裂解,導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長試劑B的處理時間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理,沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

3.用什么方法定量蛋白?
建議用BCA法。不適合用Bradford法,因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份,導(dǎo)致定量不準。如果已經(jīng)進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系,則可以用Bradford法定量。

4.提取時出現(xiàn)膠狀沉淀?
蛋白提取液處理產(chǎn)物中有時會出現(xiàn)少量透明膠狀物,屬正?,F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物。不檢測和基因組DNA結(jié)合特別緊密的特定蛋白的情況下,可以直接離心取上清進行后續(xù)實驗即可;如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白,則可以通過超聲處理,300w/10秒間隔10秒,超聲3分鐘,隨后離心取上清用于后續(xù)實驗。也可以加入Benzonase核酸酶處理提高蛋白回收率。

5.提取的蛋白具有活性嗎?
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份,不破壞蛋白的結(jié)構(gòu),沒有對蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞,蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。

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