多克隆抗體，針對(duì)含有乙酰化賴氨酸12（H2BK12ac）的組蛋白H2B區(qū)域，使用KLH偶聯(lián)的合成肽免疫制備。

作為BPS Bioscience在中國(guó)的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦BPS Bioscience銷(xiāo)售產(chǎn)品Anti-H2BK12ac多克隆抗體。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

Anti-H2BK12ac多克隆抗體：

單克隆性：多克隆  

宿主物種/表達(dá)系統(tǒng)：兔  

純化方法：親和純化  

形式：水性緩沖溶液  

配方：含有0.05%疊氮化物和0.05% ProClin 300的PBS  

濃度：50 ?g/61 ?l  

免疫原：合成肽  

儲(chǔ)存/穩(wěn)定性  

儲(chǔ)存于–80°C，最長(zhǎng)可達(dá)2年。分裝以避免反復(fù)凍融循環(huán)。分裝樣本可在–20°C下至少儲(chǔ)存一個(gè)月。

針對(duì)H2BK12ac的抗體的ChIP結(jié)果  

使用人類(lèi)HeLa細(xì)胞、針對(duì)H2BK12ac的抗體（產(chǎn)品編號(hào)25232）以及優(yōu)化的qPCR引物對(duì)進(jìn)行染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)使用了150萬(wàn)細(xì)胞的剪切染色質(zhì)。實(shí)驗(yàn)中使用了0.5、1、2和5 ?g的抗體梯度，并以IgG（1 ?g/IP）作為陰性免疫沉淀對(duì)照。qPCR使用特異性引物針對(duì)GAPDH和ACTB基因啟動(dòng)子上游約1 kb的區(qū)域（作為陽(yáng)性對(duì)照）以及非活性MYOD1基因的編碼區(qū)和Sat2衛(wèi)星重復(fù)序列（作為陰性對(duì)照）。圖1顯示了回收率，以輸入量的百分比表示（免疫沉淀DNA相對(duì)于輸入DNA的相對(duì)量，經(jīng)qPCR分析后得出）。

針對(duì)H2BK12ac的抗體的ChIP-seq結(jié)果  

使用0.5 ?g針對(duì)H2BK12ac的抗體（產(chǎn)品編號(hào)25232），對(duì)150萬(wàn)HeLaS3細(xì)胞的剪切染色質(zhì)進(jìn)行ChIP實(shí)驗(yàn)，如上所述。隨后，免疫沉淀DNA通過(guò)Illumina HiSeq進(jìn)行分析。文庫(kù)制備、簇生成和測(cè)序均按照制造商的說(shuō)明進(jìn)行。51 bp標(biāo)簽通過(guò)BWA算法與人類(lèi)基因組比對(duì)。圖2顯示了整個(gè)序列的富集情況以及X染色體上1 Mb區(qū)域（圖2A和B）和7號(hào)染色體上ACTB基因周?chē)鷧^(qū)域以及12號(hào)染色體上GAPDH基因周?chē)鷧^(qū)域的基因組區(qū)域（圖2C和D）。用于ChIP-qPCR的擴(kuò)增子位置用箭頭表示。

抗體效價(jià)測(cè)定  

為了測(cè)定抗體的效價(jià)，采用ELISA方法，使用針對(duì)H2BK12ac（產(chǎn)品編號(hào)25232）的抗體稀釋液在抗原包被的孔中進(jìn)行檢測(cè)。所用抗原為含有感興趣組蛋白修飾的肽。通過(guò)繪制吸光度與抗體稀釋度的關(guān)系圖（圖3），估計(jì)抗體的效價(jià)為1:38,200。

針對(duì)H2BK12ac的抗體的交叉反應(yīng)性測(cè)試  

為了測(cè)試針對(duì)H2BK12ac（產(chǎn)品編號(hào)25232）的抗體的交叉反應(yīng)性，采用點(diǎn)樣分析法（Dot Blot），使用含有其他組蛋白修飾和未修飾H2B序列的肽。將100至0.2皮摩爾的相應(yīng)肽點(diǎn)樣于膜上?？贵w稀釋度為1:5,000。圖4顯示該抗體對(duì)感興趣的修飾具有高特異性。

針對(duì)H2BK12ac的抗體的Western blot分析  

采用Western blot方法，對(duì)HeLa細(xì)胞的全細(xì)胞提取物（25 ?g，第1泳道）和組蛋白提取物（15 ?g，第2泳道）以及1 ?g的重組組蛋白H2A、H2B、H3和H4（分別對(duì)應(yīng)第3、4、5和6泳道）進(jìn)行檢測(cè)，使用針對(duì)H2BK12ac（產(chǎn)品編號(hào)25232）的抗體?？贵w在含有5%脫脂奶粉的TBS-Tween中稀釋1:1,000。左側(cè)顯示了標(biāo)記的分子量（以千道爾頓計(jì)）。

應(yīng)用  

- ChIP/ChIP-seq（0.5 – 1 ?g/ChIP）  

- ELISA（1:1000）  

- 點(diǎn)樣分析（DB，1:5000）  

- Western blot（WB，1:1000）  

運(yùn)輸溫度：–20°C或–80°C  

物種反應(yīng)性：人  

注意事項(xiàng)：最終用戶應(yīng)確定每次免疫沉淀的優(yōu)良抗體用量。我們建議測(cè)試1–5 ?g/IP。  

警告：避免反復(fù)凍融循環(huán)。  

科學(xué)分類(lèi)：抗體  

監(jiān)管狀態(tài)：僅限研究使用

產(chǎn)品數(shù)據(jù)庫(kù)：

BPS Bioscience是一家通過(guò)ISO 9001:2015認(rèn)證的生命科學(xué)領(lǐng)域的供應(yīng)商，公司一直致力于開(kāi)發(fā)藥物研發(fā)領(lǐng)域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創(chuàng)立，從創(chuàng)立至今一直致力于提供藥物研發(fā)領(lǐng)域的創(chuàng)新解決方案，以推動(dòng)新的藥物發(fā)現(xiàn)a。公司主要關(guān)注的領(lǐng)域包括免疫療法、表觀遺傳學(xué)、CRISPR、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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