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武漢艾美捷科技有限公司
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Ultra超敏-小鼠白蛋白試劑盒的操作要點(diǎn)與數(shù)據(jù)分析

時(shí)間:2024/10/9閱讀:89
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ALB檢測(cè)試劑盒是一種高靈敏度的雙位點(diǎn)酶聯(lián)免疫測(cè)定法(ELISA),用于測(cè)量小鼠的ALB生物樣本。如果ELISA要在預(yù)期用途之外使用,用戶可能需要優(yōu)化所述使用。

 

艾美捷小鼠白蛋白ELISA試劑盒E-90AL檢測(cè)原理:

雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)的原理在圖1中表示。在這種測(cè)定中,樣品中存在的白蛋白(ALB)與已吸附到聚苯乙烯微孔板表面的抗ALB抗體反應(yīng)。通過(guò)洗滌去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)后,加入與辣根過(guò)氧化物酶(HRP)結(jié)合的抗ALB抗體。這些酶標(biāo)記的抗體與之前結(jié)合的ALB形成復(fù)合物。經(jīng)過(guò)另一次洗滌步驟后,通過(guò)添加顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺(TMB),測(cè)定免疫吸附劑上結(jié)合的酶。結(jié)合的酶量與測(cè)試樣品中ALB的濃度直接相關(guān);因此,450納米處的吸光度是測(cè)試樣品中ALB濃度的量度。測(cè)試樣品中ALB的量可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線中插值得出,并根據(jù)樣品稀釋進(jìn)行校正。

21.png

未提供的所需材料:

精密移液器(2微升至100微升),用于制備和分發(fā)稀釋液

試管

噴霧瓶或微孔板洗滌器/抽吸器

蒸餾水或去離子水

微孔板讀取器

用于制備試劑和緩沖溶液的各種玻璃器皿

樣本收集用的離心機(jī)

血漿收集用的抗凝劑

計(jì)時(shí)器

 

小鼠白蛋白ELISA試劑盒樣本收集和處理:

所有血液成分和生物材料應(yīng)視為潛在危險(xiǎn)。處理和處置時(shí)遵循通用預(yù)防措施。

如果血液樣本出現(xiàn)凝固、嚴(yán)重溶血、脂血,或樣本完整性受到質(zhì)疑,請(qǐng)做記錄并謹(jǐn)慎解釋結(jié)果。

以下列出的樣本收集和儲(chǔ)存條件僅供參考。尚未評(píng)估樣本穩(wěn)定性。

血清樣本 應(yīng)通過(guò)靜脈穿刺收集血液。血凝塊形成后通過(guò)離心分離血清。取出血清并立即進(jìn)行測(cè)定或分裝樣本并儲(chǔ)存于-80°C(最好)或-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

血漿樣本 應(yīng)將血液收集到含有抗凝劑的容器中,然后進(jìn)行離心。立即進(jìn)行測(cè)定或分裝樣本并儲(chǔ)存于-80°C(最好)或-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

尿液樣本 使用無(wú)菌或干凈的尿液收集器收集中段尿液。離心以去除細(xì)胞碎片。立即進(jìn)行測(cè)定或分裝樣本并儲(chǔ)存于-80°C(最好)或-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

已知干擾物質(zhì) 濃度高于0.1%的氮化物和硫柳汞會(huì)抑制酶反應(yīng)。

 

樣本稀釋:

測(cè)定要求在測(cè)試前對(duì)每個(gè)測(cè)試樣本進(jìn)行稀釋。每次進(jìn)行測(cè)定時(shí),所有樣本都應(yīng)以雙份進(jìn)行測(cè)定。推薦的稀釋只是建議。稀釋?xiě)?yīng)基于未知樣本的預(yù)期濃度,使稀釋后的樣本落在標(biāo)準(zhǔn)曲線的動(dòng)態(tài)范圍內(nèi)。如果不確定樣本水平,在運(yùn)行整個(gè)板之前,強(qiáng)烈建議對(duì)一個(gè)或兩個(gè)代表性樣本進(jìn)行系列稀釋。

血清樣本 推薦的起始稀釋為1/500,000。要準(zhǔn)備1/500,000的樣本稀釋,將2微升的樣本轉(zhuǎn)移到1998微升的1倍稀釋液中。這給出1/1,000的稀釋。接下來(lái),將1/1,000的樣本通過(guò)轉(zhuǎn)移2微升到998微升的1倍稀釋液中進(jìn)行稀釋。這產(chǎn)生1/500,000的稀釋。每個(gè)階段都要c底混合。

血漿樣本 推薦的起始稀釋為1/500,000。要準(zhǔn)備1/500,000的樣本稀釋,將2微升的樣本轉(zhuǎn)移到1998微升的1倍稀釋液中。這給出1/1,000的稀釋。接下來(lái),將1/1,000的樣本通過(guò)轉(zhuǎn)移2微升到998微升的1倍稀釋液中進(jìn)行稀釋。這產(chǎn)生1/500,000的稀釋。每個(gè)階段都要c底混合。

尿液樣本 推薦的起始稀釋為1/500。要準(zhǔn)備1/500的樣本稀釋,將2微升的樣本轉(zhuǎn)移到998微升的1倍稀釋液中。這給出1/500的稀釋。c底混合。

 

小鼠白蛋白ELISA試劑盒試劑準(zhǔn)備:

使用前將所有試劑置于室溫(16°C25°C)。

稀釋液濃縮液 提供的稀釋液是5倍濃縮液,必須用蒸餾水或去離子水(1份緩沖液濃縮液,4dH2O)稀釋1/5。

洗滌液濃縮液 提供的洗滌液是20倍濃縮液,必須用蒸餾水或去離子水(1份緩沖液濃縮液,19dH2O)稀釋1/20。濃縮液在儲(chǔ)存溫度較低時(shí)可能會(huì)形成晶體。在稀釋前將濃縮液加熱至30-35°C可以溶解晶體。

-抗體結(jié)合物 通過(guò)向每個(gè)微孔板測(cè)試條中添加10微升酶-抗體結(jié)合物到990微升1倍稀釋液中,計(jì)算每個(gè)微孔板測(cè)試條所需的工作結(jié)合物溶液量。使用前立即稀釋,并避光保存。均勻但輕柔地混合。避免起泡。

預(yù)涂覆ELISA微孔板 按提供狀態(tài)使用。打開(kāi)箔袋,從袋中取出板。取出在測(cè)定中不會(huì)使用的所有的條和孔,放回袋中并重新密封,連同干燥劑。

小鼠ALB校準(zhǔn)液 根據(jù)批次特定的分析證書(shū)進(jìn)行準(zhǔn)備。


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