EHA105 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞10×100μL*規(guī)格及成分：

EHA105 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞10×100μL*產(chǎn)品及特點(diǎn)：

本產(chǎn)品是采用特殊工藝處理得到的大腸桿菌 DH10 Bac 感受態(tài)細(xì)胞，適用于昆蟲桿狀病毒 Bac-to-Bac 系統(tǒng)中同源重組的菌株，用于產(chǎn)生重組 Bacmid。使用 pUC19 質(zhì)粒檢測(cè)，本產(chǎn)品轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 107CFU/μg。 DH10Bac 細(xì)胞包含親本 Bacmid bMON14272 和輔助質(zhì)粒 pMON7124。親本 Bacmid 包含一個(gè) mini-F 復(fù)制子、卡那霉素抗性基因、att Tn7 位點(diǎn)和 lac Zα-互補(bǔ)因子。輔助質(zhì)粒包含 tns ABCD 區(qū)域，該區(qū)域提供了 mini-Tn7 從供體質(zhì)粒插入親本 Bacmid 靶位點(diǎn)所需要的轉(zhuǎn)座蛋白。供體如 pFastBac 系列質(zhì)粒（pFastBac1，pFastBacDual 等）含有 Tn7R 和 Tn7L 同源重組臂，Tn7R 和 Tn7L 之間包含慶大霉素抗性基因、昆蟲病毒多角體基因啟動(dòng)子、多克隆位點(diǎn)和 SV40 病毒的 PolyA 加尾信號(hào)。當(dāng)含有靶基因 pFastBac 的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到 DH10Bac 細(xì)胞后，發(fā)生重組后就可產(chǎn)生重組 Bacmid，提取純化重組 Bacmid 轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞 Sf9 或 Sf21 就可以包裝產(chǎn)生昆蟲病毒。此外，DH10Bac 細(xì)胞中的 The φ80dlacZDM15 基因的產(chǎn)物可以實(shí)現(xiàn)β-半乳糖苷酶的α-互補(bǔ)現(xiàn)象，用于重組 bacmid 的藍(lán)白斑篩選。菌株基因型為：F- mcrA Δ(mrrhsdRMSmcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara,leu)7697 galU galK λ- rpsL nupG/pMON14272/pMON7124 。
EHA105 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞10×100μL*使用方法：
1. 制備含有如下抗生素的 LB 固體平板：50 μ g/mL Kanamycin，7 μ g/mL gentamicin，10 μg/mL tetracycline，100 μg/mL X-gal，40 μg/mL IPTG。
2. 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為 50-100 μL，可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。以下實(shí)驗(yàn)以 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞為例。
3. 待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入 1-10 ng 重組質(zhì)粒，用移液器輕輕吹打混勻，冰浴 30 分鐘。
4. 42℃熱擊 90 秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置 2-3 分鐘。
5. 每個(gè)離心管中加入 900 μL 無菌的 SOC（不含抗生素），混勻后置于 37℃ 搖床， 200rpm 振蕩培養(yǎng) 4 小時(shí)。
6. 用 SOC 培養(yǎng)基進(jìn)行 10 倍梯度稀釋，如分成 3 個(gè)稀釋梯度 10-1,10-2,10-3。
7. 取 100 μL 的各個(gè)梯度的培養(yǎng)物用于涂布。等平板中的液體*吸收后，倒置平板， 37℃培養(yǎng) 24-48 小時(shí)。 8. 保留剩余的菌液保存于 4℃，視平板上菌落生長情況決定去留。

球毛殼 Chaetomium globosum
宇佐美曲霉 Aspergillus usamii
大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum
NR8383(大鼠肺泡巨噬細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
桿菌屬 Lactobacillus sp.
苜蓿中華根瘤菌 Sinorhizobium meliloti
TBS500ml國產(chǎn)
酸球菌亞種 Lactococcus lactis subsp. lactis
毛柄金錢菌(金針菇) Flammulina velutipes
小鼠子宮平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
人椎間盤髓核細(xì)胞*培養(yǎng)基100mLShorr（紹氏）染色法特殊細(xì)胞染色試劑盒
Unna Pappenheim甲基綠派洛寧法核酸染色試劑盒
Benitz-Fischer明膠作用法乳酸脫氫酶顯色試劑盒
Mann涅格里體染色法病毒包涵體染色試劑盒
Anticoagulant ACD Solution（抗凝劑ACD)
CAPS Buffer,0.5M,pH9.0
Dulbecco's Phosphate Buffered Saline（D-PBS，杜氏PBS緩沖液，含鈣鎂），1×
HCl Solution（鹽酸溶液）,1M
Lactate Buffered Ringer’s Solution（乳酸鹽林格液）
MOPS Buffer,1.0M,pH7.0
Phosphate Buffer，0.2M, pH9.0
Potassium Phosphate Solution，0.5M, pH7.0
Saponine Permeating Solution in PBS（皂素PBS滲透液）,5X
Sucrose Gelatin Veronal Buffer (SGVB)
Tricine Buffered Saline,5X,pH7.4
Yeast Lysis Buffer (for mini prep)
8A
E2-Orange（E2Orange）
hmMiCy1
L3605
lac operator
M13Gori1
凍膠假絲酵母 Candida gelida
EHA105 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞10×100μL*醋酸鈣不動(dòng)桿菌 Acinetobacter calcoaceticus
EBTr (NBL-4) (牛胚氣管細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
酒假絲酵母 Candida kefyr
豌豆根瘤菌 Rhizobium leguminosarum
MLA144臂猿淋巴瘤細(xì)胞英文名稱：MLA144gersion
地衣芽孢桿菌 Bacillus licheniformis