細(xì)胞培養(yǎng)需要的胰酶和雙抗

胰酶和雙抗作為細(xì)胞培養(yǎng)過程中試劑的一部分，對細(xì)胞培養(yǎng)成功與否存在著關(guān)鍵的作用。但是對于胰酶和雙抗的基礎(chǔ)知識還是要多多了解的，不然就有可能禍禍你的細(xì)胞哦！

胰酶

胰酶是什么？

胰酶是一種解離試劑，本質(zhì)是可以降解蛋白的酶，生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中常用來把貼壁細(xì)胞從貼壁面解離下來和使細(xì)胞解聚，也可以用于原代細(xì)胞的傳代過程中分散組織。

胰酶使用的濃度是多少？

胰酶濃度：常見濃度為0.25%的胰酶（含有螯合劑），半貼壁細(xì)胞或者對胰酶敏感的細(xì)胞，可采用0.05%濃度的胰酶（含有或者不含有螯合劑）進(jìn)行細(xì)胞消化。

為什么收到的胰酶會有顏色差異？

商品化胰酶溶液需要用干冰運(yùn)輸，在運(yùn)輸過程中，胰酶溶液中的二氧化碳與干冰揮發(fā)的二氧化碳可能會極少部分的氣體交換，導(dǎo)致溶液PH的漂移。有些胰酶溶液里含有酚紅作為PH值指示劑，因此胰酶PH的變化是肉眼可觀察到的。由干冰運(yùn)輸過程中導(dǎo)致的PH值的變化很小，PH值會從7.2-8.0變化到了6.8左右，在PH值7.2-8.0的時(shí)候，溶液呈淡紅色；PH值6.8左右時(shí)呈淡黃色的。因此胰酶顏色的變化是由PH值的變化引起，歸因于使用干冰運(yùn)輸。這種顏色的變化是行業(yè)普遍現(xiàn)象，在不同供應(yīng)商的胰酶產(chǎn)品都會出現(xiàn)。

淡黃色的胰酶溶液能放心使用嗎？

簡單一個(gè)字：能

對于胰酶呈黃色的問題，不同品牌也都對此現(xiàn)象進(jìn)行了測試實(shí)驗(yàn)。變色的胰酶同樣能很好的用于細(xì)胞的解離，請放心使用。

細(xì)胞消化時(shí)，胰酶不去除對細(xì)胞的影響

細(xì)胞消化時(shí)，如果消化液中只有胰酶，不含EDTA，不去除是沒有問題的。

如果消化液中含有胰酶和EDTA，去除。EDTA是一種化學(xué)螯合劑，主要作用在于能螯合Ca、Mg離子，使細(xì)胞分離。但EDTA不能被血清中和，消化后要*清洗去除，否則細(xì)胞易脫壁。胰酶胰酶和EDTA聯(lián)合使用可提高消化效率，所以常二者合用。

胰酶的保存

胰酶可在-20℃下保存一年。隨著時(shí)間延長，胰酶的消化能力減弱。由于胰酶自身也是一種蛋白，胰酶也會自己剪切自己，建議胰酶不要反復(fù)凍融，拿到手中的大瓶胰酶進(jìn)行分裝使用。胰酶可分裝凍存，在使用前從-20℃冰箱取出。盡量避免在4℃長期保存。

雙抗

什么是雙抗？

雙抗就是青鏈霉素混合液(100X) ，是專門用于細(xì)胞培養(yǎng)的，可以直接添加到細(xì)胞培養(yǎng)液內(nèi)。

雙抗作用是什么？

雙抗起的作用：抗生素，抑制細(xì)菌生長；避免細(xì)胞污染。

培養(yǎng)液中需要加入雙抗嗎？

加不加雙抗不是的，視實(shí)際情況而定。

如果你實(shí)驗(yàn)室條件足夠好，如果你操作足夠規(guī)范，就盡量不要加雙抗了。相反，如果你實(shí)驗(yàn)條件不夠，操作也沒有把握，還是加的好。的方法是做個(gè)實(shí)驗(yàn)對照，看有沒有必要加雙抗。

如何加入雙抗？

在細(xì)胞培養(yǎng)液中推薦的青霉素的工作濃度為100U/ml，鏈霉素的工作濃度為0.1mg/ml。

如果加多了話對細(xì)胞毒性太大，細(xì)胞生長艱難。加入雙抗時(shí)，一般先加在培養(yǎng)基里，因?yàn)槿绻侵苯釉趽Q液傳代滴加的話，那個(gè)雙抗的濃度實(shí)在不好控制。

誤區(qū)：長期使用抗生素，以對抗污染

細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)不應(yīng)常規(guī)使用抗生素

連續(xù)使用抗生素會促進(jìn)抗生素耐藥性細(xì)胞株的產(chǎn)生，導(dǎo)致輕度污染持續(xù)存在，一旦將抗生素從培養(yǎng)基中去除，這種輕度污染zui終將發(fā)展成大規(guī)模污染

連續(xù)使用抗生素會掩蓋支原體感染及其他隱性污染

有些抗生素會與細(xì)胞發(fā)生交叉反應(yīng)，干擾您研究的細(xì)胞過程

雙抗的保存

雙抗通常情況下在-20℃保存一年。由于該試劑在4℃下長期存放是不穩(wěn)定的，應(yīng)分裝后在-20℃下避光保存。青霉素在2-8的℃存放時(shí)間不應(yīng)超過4天，鏈霉素相對穩(wěn)定一點(diǎn)，在2-8℃可以存放30天左右。切記，雙抗從凍融后里面的基本成分已開始降解。