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詳細(xì)介紹
Bst DNA Polymerase
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鏈置換酶
◆產(chǎn)品說明
本產(chǎn)品具有5’→ 3’DNA聚合酶活性與鏈置換活性，是一款自動(dòng)從模板雙鏈DNA的氫鍵解離，然后后合成新DNA鏈的酶。由于其特性，耐熱性鏈置換DNA聚合酶無需DNA的雙鏈解離，即可在恒定溫度下合成DNA，且合成不受DNA二級(jí)結(jié)構(gòu)的抑制。
特點(diǎn)
● 具有5’→ 3’DNA聚合酶活性與鏈置換活性
● 可在恒定溫度下合成DNA
● 適用于合成GC含量高的DNA鏈
● 合成不受DNA二級(jí)結(jié)構(gòu)抑制
應(yīng)用
● 利用鏈置換活性的應(yīng)用（等溫基因擴(kuò)增法等）
理想反應(yīng)溫度 | 60°C～65°C |
失活時(shí)間*1 | 80°C、5分鐘 |
*1 將酶原液直接熱變性時(shí)的失活溫度
來源 | 嗜熱脂肪芽孢桿菌 |
活性 | 8 units/μL |
單位定義 | 1 unit指以小牛胸腺DNA為引物/模板，在65°C，30分鐘的條件下將10 nmol的dNTP摻入酸不溶性沉淀物的酶量。 |
儲(chǔ)存液成分 | 10 mmol/L Tris-HCl（pH 7.5）, 1 mmol/L DTT, 0.1% Tween 20, 0.1 mmol/L EDTA, 50% 丙三醇 |
酶反應(yīng)條件 | 隨酶附帶10×的酶反應(yīng)緩沖液（0.5 mL×1）。如反應(yīng)總體積為50 μL，添加5 μL的酶反應(yīng)緩沖液 |
◆產(chǎn)品組成
Bst DNA Polymerase（1,600 units）
產(chǎn)品組分 | 容量 | 保存 |
Bst DNA Polymerase（8units/μL） | 200微升×1 | -20°C |
10× Bst Reaction Buffer（80mmol/L Mg2+） | 500微升×1 | -20°C |
◆應(yīng)用實(shí)例
實(shí)驗(yàn)案例1 LAMP法中的運(yùn)用
LAMP法 反應(yīng)條件
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| 3.0% Agarose 21 TAE凝膠電泳 EtBr染色
M：Gene Ladder Wide 1 1：A 公司Bst DNA Polymerase 2：本公司Bst DNA Polymerase |
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Candidatus Liberibacter asiaticus DNA | 1 × 106copies |
FIP* | 40pmol |
BIP* | 40pmol |
F3 Primer* | 5pmol |
B3 Primer* | 5pmol |
Loop Primer F* | 20pmol |
Loop Primer B* | 20pmol |
dNTPs Mixture | 1.4mM each |
10 × Bst Reaction Buffer | 2.5μL |
Bst DNA Polymerase | 8units |
總計(jì) | 25μL |
反應(yīng)
65°C | 60分鐘 |
*引物序列
FIP: 5'-GCATGCCGAGGATCAATGCCTTGCTTAAAGAGCGTGCTACG-3'
BIP: 5'-TATGCCTAATGGCACGGGGGTAAGCTTCATCCGCCTTCGA-3'
F3 Primer: 5'-TGGGTTAAGTGATGCTGTGG-3'
B3 Primer: 5'-CAACAATATCAGCCCCTGCT-3'
Loop Primer F: 5'-TCTCAACTGTTTCATCAAACCTAGC-3'
Loop Primer B: 5'- CGTGGCGGTTTTTGCTACA-3'
實(shí)驗(yàn)案例2 RCA法評(píng)估Bst DNA Polymerase的耐熱性與理想反應(yīng)溫度
RCA法 反應(yīng)溶液組成
M13mp18 single strand DNA | 40ng |
Universal primer | 50mM |
dNTPs Mixture | 1.4mM each |
Tris-HCl (pH 8.8 at 25°C) | 20mM |
KCl | 10mM |
(NH4)2SO4 | 10mM |
MgSO4 | 8mM |
Tween 20 | 0.10% |
Betaine | 0.8M |
Bst DNA Polymerase | 4units |
總計(jì) | 20μL |
反應(yīng)條件
各個(gè)溫度下 | 30分鐘 |
結(jié)果
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條帶
M：Gene Ladder Wide 1
D：模板 DNA (M13mp8 single strand）
引物序列
5'-GTTTTCCCAGTCACGACGTTGTA-3'
電泳條件
0.7% Agarose S/TAE凝膠電泳
EtBr染色
使用不含SDS的上樣緩沖液
備注
本實(shí)驗(yàn)為比較兩種Bst DNA Polymerase，使用相同的反應(yīng)液組成進(jìn)行反應(yīng)。在RCA法中使用各種酶配套的緩沖液時(shí)，須進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)探究反應(yīng)體系。
◆相關(guān)信息
備注
● 本產(chǎn)品為實(shí)驗(yàn)研究用試劑。不可作為醫(yī)藥品使用。
● 檢測(cè)柑橘黃龍病菌的LAMP引物組合是國立研究開發(fā)法人 農(nóng)業(yè)、食品產(chǎn)業(yè)技術(shù)綜合研究機(jī)
● 構(gòu)九州沖繩農(nóng)業(yè)研究中心靈活運(yùn)用先進(jìn)技術(shù)，在農(nóng)林水產(chǎn)研究高度化事業(yè)“抑制頑固性疾病柑橘綠化病傳播的技
● 術(shù)開發(fā)”中開發(fā)的產(chǎn)品。
許可
● LAMP法由榮研化學(xué)株式會(huì)社持有專.利權(quán)。
◆產(chǎn)品列表
產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
311-07481 | Bst DNA Polymerase | 1600units |
◆相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
319-07281 | Csa DNA Polymerase | 1600units |
319-07301 | 96-7 DNA Polymerase | 1600units |
312-07271 | dNTPs Mixture（25mM each） | 400微升 |
富士膠片和光（廣州）貿(mào)易有限公司是日本富士膠片和光純藥株式會(huì)社（FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation，以下稱"富士膠片和光"）在中國的子公司，主營富士膠片和光品牌試劑產(chǎn)品，囊括合成與材料、分析、培養(yǎng)、生命科學(xué)、藥品生產(chǎn)與品質(zhì)管理領(lǐng)域。和光純藥工業(yè)株式會(huì)社（前武田藥品工業(yè)株式會(huì)社）成立于1922年，2017年被富士膠片集團(tuán)全面收購而成為集團(tuán)成員之一。富士膠片和光是日本的試劑企業(yè)，也是優(yōu)質(zhì)的試劑供應(yīng)商，在美國、歐洲和中國都設(shè)有分公司。自成立以來，一直致力于高品質(zhì)的試劑生產(chǎn)與開發(fā)，并獲得ISO9001，ISO/IEC17025，ISO14000等（部分）多項(xiàng)認(rèn)證。
通過對(duì)本次收購，富士膠片集團(tuán)將充分發(fā)揮其在膠片領(lǐng)域積累的化學(xué)合成、納米、生產(chǎn)等技術(shù)，在醫(yī)療健康事業(yè)、高性能材料事業(yè)兩個(gè)核心業(yè)務(wù)中實(shí)現(xiàn)協(xié)同增效作用。尤其是醫(yī)療健康事業(yè)，在頗具市場(chǎng)潛力的再生醫(yī)學(xué)、生物制藥等領(lǐng)域都將產(chǎn)生巨大的協(xié)同增效作用。
富士膠片和光所供應(yīng)的FUJIFILM Wako品牌試劑產(chǎn)品超過50,000多種，涉及生命科學(xué)、分析化學(xué)、有機(jī)、無機(jī)化學(xué)、生物工程、高純度及認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn)品、食品、醫(yī)藥、環(huán)境分析、疾病和有效治療研究、再生醫(yī)療研究、天然提取物、中藥研究等，從基礎(chǔ)研究至關(guān)乎人類健康的前沿的生命科學(xué)研究都有相關(guān)產(chǎn)品。
隨著富士膠片集團(tuán)對(duì)生命科學(xué)領(lǐng)域的更大重視和投入，今后富士膠片和光將繼續(xù)為中國客戶提供更多前沿、品質(zhì)可靠的產(chǎn)品。
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