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用恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元原代細胞

閱讀:1419      發(fā)布時間:2018-12-14
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神經(jīng)元培養(yǎng)的portocol,是較難培養(yǎng)的一種細胞。關鍵就是大鼠年齡的選擇,是胎鼠,新生鼠還是成年大鼠,理想的是胎鼠。今天喆圖小編就從這個說起,用恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元原代細胞的幾種培養(yǎng)的方法。

1.海馬分離:剖宮產(chǎn)取出胚胎,放在保存液中移至顯微鏡下操作取出胎腦,去掉小腦,從中線切開左右大腦半球。剝?nèi)ボ浤X膜以及脈絡叢血管。然后鈍性分離海馬,顯微鏡下用剪刀剪下海馬即可

2. 組織消化和計數(shù):每個取出的海馬組織都放置在含有4℃培養(yǎng)液的試管中??焖俜蛛x數(shù)個胎鼠海馬后就可以做消化和細胞計數(shù)了。消化液用經(jīng)典的胰蛋白酶于恒溫培養(yǎng)箱中 37℃恒溫 30分鐘即可。然后吹打(1000ul tip 10-20次,2ml 灼燒拉伸的玻璃管,口徑與200ul tip相當,吹打10-20次)到看不到組織為止。很多protocol建議此刻離心。消化后去上清,留1-2ml直接吹打,然后就可以直接細胞計數(shù)。

3. 分盤培養(yǎng):神經(jīng)元會長的很大,所以密度要低,50000/ml就可以了,100mm的plate, 5-7ml。培養(yǎng)液用無血清無抗生素加B27和N2的DMEM效果就很好。培養(yǎng)皿要用PDL和含血清以及抗生素的培養(yǎng)液預處理72小時。這樣可以避免感染也讓神經(jīng)元容易附著和分化。每一周加1-2ml的新鮮培養(yǎng)液,于恒溫培養(yǎng)箱中37℃恒溫,2-3周即可成熟。

4.染色檢測:后就是標記蛋白檢測,一般可用MAP2標記神經(jīng)纖維,一些神經(jīng)遞質(zhì)受體標記突觸,NeuN標記神經(jīng)元細胞核。

以上恒溫培養(yǎng)箱實驗內(nèi)容僅供參考,詳情請聯(lián)系喆圖客服!

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