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活體細(xì)胞溶酶體膜通透性(LMP)/完整性吖啶橙熒光檢測試劑盒

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  • 活體細(xì)胞溶酶體膜通透性(LMP)/完整性吖啶橙熒光檢測試劑盒

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更新時(shí)間:2016-01-15 10:15:39瀏覽次數(shù):4387

聯(lián)系我們時(shí)請說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,謝謝!

產(chǎn)品簡介

活體細(xì)胞溶酶體膜通透性(LMP)/完整性吖啶橙熒光檢測試劑盒是一種旨在通過吖啶橙吸收和細(xì)胞內(nèi)再分布檢測技術(shù),選擇性地聚集在線粒體內(nèi)呈現(xiàn)熒光染色,即存在于或由溶酶體釋放到細(xì)胞漿的熒光染料的不同熒光強(qiáng)度變化,來分析和觀察溶酶體膜通透性的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種活體細(xì)胞溶酶體(動(dòng)物、人體、昆蟲等)膜通透性的檢測。

詳細(xì)介紹

本頁描述的產(chǎn)品僅供科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用,不用于臨床,非醫(yī)療器械,不做其他用途。

產(chǎn)品編號(hào):10387.1

名稱:活體細(xì)胞溶酶體膜通透性(LMP)/完整性吖啶橙熒光檢測試劑盒    

規(guī)格:20次

價(jià)格:客服

活體細(xì)胞溶酶體膜通透性(LMP)/完整性吖啶橙熒光檢測試劑盒保存方式:

保存染色液(Reagent B)在-20℃冰箱里,避免光照;其余的保存在4℃冰箱里;有效保證6月

用戶自備

24孔細(xì)胞培養(yǎng)板:用于貼壁細(xì)胞染色的容器
1.5毫升離心管:用于細(xì)胞染色的容器
微型臺(tái)式離心機(jī):用于沉淀細(xì)胞
培養(yǎng)箱:用于染色孵育

(共聚焦)熒光顯微鏡:用于細(xì)胞熒光分析
熒光分光光度儀或熒光酶標(biāo)儀:用于細(xì)胞熒光定量分析
細(xì)胞流式儀:用于細(xì)胞熒光分析

實(shí)驗(yàn)步驟

  • 貼壁細(xì)胞染色
  • 準(zhǔn)備1個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)24孔板的待測細(xì)胞(注意:可以使用載玻片,載玻片培養(yǎng)皿,35mm培養(yǎng)皿,和其它培養(yǎng)孔板,見注意事項(xiàng)8)
  • 小心抽去細(xì)胞培養(yǎng)液
  • 小心沿著孔壁加入xx微升37℃預(yù)熱的清理液(Reagent A)到1個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)孔,覆蓋培養(yǎng)孔表面
  • 小心抽去清理液
  • 小心沿著孔壁加入xx微升染色液(Reagent B)到1個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)孔,覆蓋培養(yǎng)孔表面
  • 放進(jìn)37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱里孵育15分鐘,避免光照
  • 小心抽去染色液(Reagent B)
  • 小心沿著孔壁加入xx微升37℃預(yù)熱的清理液(Reagent A)到細(xì)胞培養(yǎng)孔
  • 小心抽去清理液
  • 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟8和9一次
  • 小心沿著孔壁加入xx微升37℃預(yù)熱的清理液(Reagent A)到細(xì)胞培養(yǎng)孔
  • 選擇下列方式之一進(jìn)行操作:

(A)使用倒置熒光顯微鏡觀察(定性檢測):

激發(fā)波長490nm,散發(fā)波長528nm――綠色熒光增強(qiáng),表明膜通透性(LMP)增強(qiáng)

激發(fā)波長555nm,散發(fā)波長617nm――紅色熒光減弱,表明膜通透性(LMP)增強(qiáng)

  • 使用熒光分光光度儀或熒光酶標(biāo)儀檢測(定量檢測):

激發(fā)波長490nm,散發(fā)波長528nm――RFU升高,表明膜通透性(LMP)增強(qiáng)

激發(fā)波長555nm,散發(fā)波長617nm――RFU降低,表明膜通透性(LMP)增強(qiáng)

二、懸浮細(xì)胞或脫離細(xì)胞染色

1.將懸浮細(xì)胞或脫離細(xì)胞(1 X 106細(xì)胞)移入到1.5毫升離心管
2.放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘,速度為300g(或2000RPM,例如eppendorf 5415)
3.小心抽去上清液
4.加入xx微升37℃預(yù)熱的清理液(Reagent A),混勻細(xì)胞顆粒群
5.放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘,速度為300g(或2000RPM,例如eppendorf 5415)
6.小心抽去上清液
7.加入xx微升37℃預(yù)熱的清理液(Reagent A),混勻細(xì)胞顆粒群
8.加入xx微升含有染色液(Reagent B),充分混勻 
9.放進(jìn)37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱里孵育15分鐘,避免光照
10.放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘,速度為300g(或2000RPM,例如eppendorf 5415)
11.小心抽去上清液
12.加入xx微升37℃預(yù)熱的清理液(Reagent A),混勻細(xì)胞顆粒群
13.放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘,速度為300g(或2000RPM,例如eppendorf 5415)
14.小心抽去上清液
15.重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟12至14一次
16.加入xx微升37℃預(yù)熱的清理液(Reagent A),混勻細(xì)胞顆粒群
17.選擇下列方式之一進(jìn)行操作:
a)進(jìn)行細(xì)胞流式儀分析:FL1(激發(fā)波長488nm,散發(fā)波長528nm),或FL3(激發(fā)波長555nm,散發(fā)波長617nm)觀察10000個(gè)細(xì)胞以上――
FL1:波峰右移,表明膜通透性(LMP)增強(qiáng)
FL3:波峰左移,表明膜通透性(LMP)增強(qiáng)

b)或使用(共聚焦)熒光顯微鏡觀察(定性檢測):
1)移取10微升上述細(xì)胞懸液到載波片上,蓋上蓋玻片 
激發(fā)波長490nm,散發(fā)波長528nm――綠色熒光增強(qiáng),表明膜通透性(LMP)增強(qiáng)
激發(fā)波長555nm,散發(fā)波長617nm――紅色熒光減弱,表明膜通透性(LMP)增強(qiáng)

c)或使用熒光分光光度儀檢測(定量檢測):
1)移取500微升上述細(xì)胞懸液到1毫升比色杯
2)加入xx微升清理液(Reagent A)
3)上下傾倒混勻數(shù)次
4)放進(jìn)熒光分光光度儀:
激發(fā)波長490nm,散發(fā)波長528nm――RFU升高,表明膜通透性(LMP)增強(qiáng)
激發(fā)波長555nm,散發(fā)波長617nm――RFU降低,表明膜通透性(LMP)增強(qiáng)

注意事項(xiàng)

1.本產(chǎn)品為20次(0.5毫升體系/次)操作
2.操作時(shí),須戴手套
3.操作時(shí),避免污染母液
4.建議細(xì)胞染色完成后,即刻進(jìn)行熒光檢測分析 
5.孵育時(shí),必須避免光照
6.本產(chǎn)品適合各種規(guī)格的培養(yǎng)細(xì)胞:載玻片,載玻片培養(yǎng)皿,35mm培養(yǎng)皿,和各種培養(yǎng)孔板,須相應(yīng)

調(diào)整處理液:

操作容器    建議操作體系
載玻片    100微升
載玻片培養(yǎng)皿    1毫升
35mm培養(yǎng)皿    1毫升
96孔培養(yǎng)板    100微升
48孔培養(yǎng)板    200微升
24孔培養(yǎng)板    500微升
12孔培養(yǎng)板    1毫升
6孔培養(yǎng)板    2毫升
25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶    3毫升

7.可以使用綠色熒光中激發(fā)波長490nm±20,散發(fā)波長528±38;紅色熒光中激發(fā)波長555±28,散發(fā)波長617±50
8.用戶可以持續(xù)讀數(shù)5分鐘,觀察熒光讀數(shù)的增強(qiáng)或減低,以表明熒光染料的移位變化  
9.本公司提供系列溶酶體分析試劑產(chǎn)品

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