疏水色譜柱出現(xiàn)柱壓高的原因有哪些?
疏水色譜柱是一款以粒徑為2.5um的,鍵合無孔型親水性聚合物基質為填充劑的疏水作用色譜柱。適用于蛋白質、單抗、酶等生物大分子的分離分析。由于和藥物安全以及生產(chǎn)成本息息相關,對于重組蛋白藥物(包括單抗)的非均一性分析變得越來越被重視。TSKgelButyl-NPR(4.6mmIDX3.5cm)已經(jīng)上市超過20年了,它以對蛋白的高速、高分辨率的分離性能為廣大客戶提供了幫助。新上市的Butyl-NPR(4.6mmIDX10cm)色譜柱具有更高的分辨率,可以滿足生物制藥的研究人員對于HPLC色譜柱的分辨率和分離選擇性的更高要求。
疏水色譜柱采用具有適度疏水性的填料,以含鹽水溶液作流動相,借助于溶質與固定相間的疏水相互作用實現(xiàn)分離的色譜方法。其保留機理與反相色譜基本相同,所不同的是其固定相的疏水性不如反相固定相強,多為低密度分布的甲基、乙基、丙基、丁基和苯基等。疏水作用色譜主要用于蛋白質的分離與純化。
疏水色譜柱柱壓高原因與解決方法:
柱壓過高是HPLC柱用戶zui常碰到的問題。其原因有多方面,而且常常并不是柱子本身的問題,您可按下面步驟檢查問題的起因:
1、拆去保護柱,看柱壓是否還高,否則是保護柱的問題,若柱壓仍高,再檢查
2、把色譜柱從儀器上取下,看壓力是否下降,否則是管路堵塞,需清洗,若壓力下降,再檢查
3、將柱子的進出口反過來接在儀器上,用10倍柱體積的流動相沖洗柱子,(此時不要連接檢測器,以防固體顆粒進入流動性)。這時,如果柱壓仍不下降,再檢查
4、更換柱子入口篩板,若柱壓下降,說明你的溶劑或樣品含有顆粒雜質,正是這些雜質將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高,請與廠商。