慧穎提供CAL-51細(xì)胞CAL-51細(xì)胞，中文名稱：人乳腺癌細(xì)胞，來源：美國DSMZ，活力好，狀態(tài)好，復(fù)蘇周期1-2周，*！

General information

Cell line:  CAL-51細(xì)胞

Species:  human (Homo sapiens)

Cell type:  breast carcinoma

Origin:  established from the pleural effusion metastasis of a 45-year-old woman with

progressive breast adenocarcinoma (after radio-, chemotherapy and surgery) in

1985; rare example of tumor cell line with normal karyotype

Reference(s):  14563

Biosafety level:  1

Permissions and A

restrictions:

Cell Culture Data

Morphology:  epithelial-like adherent cells growing in monolayers; the culture contains

usually a large amount of cell debris; image; image

Medium:  80% Dulbecco's MEM (4.5 g/L glucose) + 20% h.i. FBS

Subculture:  split culture 1:2 once or twice a week using trypsin/EDTA before cells reach

complete confluency; seed out at ca. 3 x 10 6 cells/175 cm 2

Incubation:  at 37 °C with 10% CO2

Doubling time:  >60 hours

Harvest:  cell harvest of ca. 15-20 x 10 6 cells/80 cm 2

Storage:  frozen with 70% medium, 20% FBS, 10% DMSO at about 2.5 x10 6 cells/ampoule

Scientific Data

Mycoplasma:  negative in DAPI, microbiological culture, RNA hybridization assays

Immunology:  cytokeratin  +,  cytokeratin-7  -,  cytokeratin-8  +,  cytokeratin-17  -,

cytokeratin-18 +, cytokeratin-19 +, desmin -, endothel -, EpCAM +, GFAP -,

neurofilament -, vimentin +

Fingerprint:  multiplex PCR of minisatellite markers revealed a unique DNA profile

Species:  confirmed as human with IEF of AST, LDH, NP

Cytogenetics:  human near-diploid karyotype with 28% tetraploidy - 46<2n>XX, no

consistent abnormality detected - rare example of tumor cell line with normal

karyotype - resembles published karyotype

Viruses:  ELISA: reverse transcriptase negative; PCR: EBV -, HBV -, HCV -, HHV-8 -,

HIV -, HTLV-I/II -, SMRV -

CAL-51細(xì)胞CAL-51細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加4-6mL*培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1、對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的*培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細(xì)胞，*脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。

PS：若客戶收到2ml小管細(xì)胞，收到細(xì)胞后，用75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作；將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右*培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進(jìn)行傳代（方法同上）。

2、對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，進(jìn)行離心收集，1000RPM條件下離心8-10分鐘，去除上清，按凍存數(shù)量加入血清及DMSO，凍存比例為90%FBS+10%DMSO。

PS：若客戶收到2ml小管細(xì)胞，收到細(xì)胞后，用75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作；將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右*培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進(jìn)行傳代（方法同上）。

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