細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
服務(wù)項(xiàng)目 | 終端報(bào)價(jià) | 說明 | 實(shí)驗(yàn)周期 |
普通細(xì)胞培養(yǎng) | 80元/天 | 普通培養(yǎng)；轉(zhuǎn)染、藥物處理等另計(jì) | 1周內(nèi) |
CCK8檢測 | 1200元/板 | 包含所有試劑及耗材 | |
細(xì)胞凋亡檢測 | 單孔90元/例 | ||
細(xì)胞周期檢測 | 單孔90元/例 | ||
流式單標(biāo) | 單孔80元/例 | 本中心現(xiàn)有抗體可免費(fèi)共享，沒有的需客戶提供一抗 | |
流式雙標(biāo) | 100元/例 | ||
流式三標(biāo) | 150元/次 | ||
質(zhì)粒轉(zhuǎn)染 | 500元/次 | ||
ROS活性氧檢測 | 120元/孔 | 包含所有試劑及耗材 | |
線粒體膜電位檢測 | 120元/孔 | ||
平板克隆形成 | 200元/孔 | 1至2周內(nèi) | |
軟瓊脂克隆形成 | 200元/孔 | ||
細(xì)胞劃痕 | 120元/孔 | 1周內(nèi) | |
細(xì)胞粘附 | 150元/孔 | 包含所有試劑及耗材 | 1周內(nèi) |
transwell轉(zhuǎn)移 | 180元/孔 | 包含所有試劑及耗材 | 1至2周內(nèi) |
transwell侵襲 | 180元/孔 | 包含所有試劑及耗材 | 1至2周內(nèi) |
常見問題FAQ
Q: CCK-8試劑盒檢測細(xì)胞增殖和毒性的優(yōu)點(diǎn)有哪些?
A: A: CCK- 8較傳統(tǒng)的MTT法優(yōu)點(diǎn)在于
1) MTT被線粒體內(nèi)的一些脫氫還原酶還原成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液來溶解而CCK- 8產(chǎn)生的formazan都是水溶性的,可以省去后續(xù)的溶解步驟，
2)CCK-8檢測靈敏度更高，更加穩(wěn)定;
3)酚紅和血清對其測定無明顯影響;
4)不必去上清，不必洗,滌細(xì)胞更加簡便;
5)對細(xì)胞無明顯毒性，加入顯色后，可以在不同時間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀板使檢測時間更加靈活，而且不影響細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
Q :在做細(xì)胞的加藥實(shí)驗(yàn)時，藥物對CCK-8測定是否有影響?如何解決?
A: 1)注意如果藥物具有還原性(如維生素C)，會和CCK-8發(fā)生顯色反應(yīng)增加吸光度。
2)藥物中的金屬對CCK-8顯色有影響:當(dāng)終濃度為1mM的氯化亞鉛、氧化鐵、硫酸銅會抑制5%,15%, 90%的顯色反應(yīng)使靈敏度降級。如果終濃度是10mM的話，將會100%抑制。解決辦法:首先要確認(rèn)藥物是否有吸收,在含有藥物的培養(yǎng)基中加入CCK-8,測定450nm的吸光度如果它的吸光度比不含藥物的培養(yǎng)基(加CCK-8)的吸光度高，則證明藥物有影響，可在加CCK-8之前更換培養(yǎng)基，去掉藥物的影響。
3) 由于培養(yǎng)基中可能含有氧化還原反應(yīng)的物質(zhì)，在正式實(shí)驗(yàn)之前建議使用一一個孔作-一 下檢測，有必要先確認(rèn)培養(yǎng)基和CCK-8是否反應(yīng)。-般正常的0D值應(yīng)該在0.4以下。
Q: CCK-8如何設(shè)定空白對照?
A :在不含細(xì)胞的培養(yǎng)基中加入CCK-8.培養(yǎng)-定的時間，測定450nm的吸光度即為空白對照。 在做加藥實(shí)驗(yàn)(細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn))時，還應(yīng)考慮藥物的吸收可在不含細(xì)胞.加入藥物的培養(yǎng)基中加入CCK-8,培養(yǎng)-定的時間，測定450nm的吸光度作為空白對照。
Q: CCK-8對于不同的細(xì)胞，靈敏度是否-樣?
A:不一樣,懸浮細(xì)胞較貼壁細(xì)胞難染色。對于貼壁細(xì)胞,一般加入CCK 8培養(yǎng)1-4小時吸光度已經(jīng)很高，但對于懸浮細(xì)胞則可能吸光度較低，可以通過延長CCK-8的加入時間或增加細(xì)胞數(shù)量來解決。
Q :可否采用CCK-8法進(jìn)行腫瘤細(xì)胞的基質(zhì)黏附實(shí)驗(yàn)?
A :可以，以層粘連蛋白(Ln)包被96孔板通過計(jì)算不同時間點(diǎn)孔板中貼壁細(xì)胞的數(shù)量反映細(xì)胞的黏附性。細(xì)胞的黏附性越強(qiáng)，則單位時間內(nèi)貼于鋪有L n板底的細(xì)胞數(shù)量越多去除尚末貼壁的細(xì)胞后,應(yīng)用CCK-8等方法計(jì)量細(xì)胞數(shù)量便可間接反映不同細(xì)胞或不同處理的細(xì)胞黏附能力的差異。
Q :可否采用CCK-8法進(jìn)行藥物的IC50檢測?
A :可以，將細(xì)胞培養(yǎng)后按照不同濃度的藥物處理定時間后進(jìn)行CCK-8檢測，根據(jù)吸光度繪制曲線，計(jì)算該藥物抑制細(xì)胞數(shù)量一半時的濃度(IC50)。
參考文獻(xiàn)
1. Ishiyama M, Miyazono Y, Sasamoto K, et al. A highly water-soluble disulfonated tetrazolium salt as a
chromogenicindicator for NADH as well as cell viability. Talanta 1997.44(7): 1299-1305.
2. Ishiyama M, Tominaga H, Shiga M, et al. A combined assay of cell viability and in vitro cytotoxicity
with a ，highlywater-soluble tetrazolium salt,
neutral red and
crystal violet.Biol Pharm Bull
1996, 19(11):1518-1520.
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