產(chǎn)品簡介:
姬姆薩染色液(Giemsa Stain,1:9)
姬姆薩色素(又稱吉姆薩色素)是由天青Ⅱ與伊紅混合而成。Giemsa 染色原理和結(jié)果與瑞氏染色基本相同,姬姆薩染色液對胞漿著色力較強(qiáng),能較好的顯示胞漿的嗜堿性程度,特別是對血液和骨髓細(xì)胞中的嗜天青、嗜酸性、嗜堿性顆粒,著色清晰,但是對胞核著色偏深, 核結(jié)構(gòu)顯色不佳,故姬姆薩染液常與瑞氏染液聯(lián)合使用。Giemsa Stain 以進(jìn)口的姬姆薩色素、甲醇為主要原料,含*襯染劑,經(jīng)研磨配制而成,能呈現(xiàn)出清晰的細(xì)胞染色效果,經(jīng)常用于組織切片、血液和細(xì)胞涂片、細(xì)菌、染色體顯帶、原生動(dòng)物寄生蟲等染色。嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì),與酸性染料伊紅結(jié)合,染粉紅色,稱為嗜酸性物質(zhì);細(xì)胞核蛋白和淋巴細(xì)胞胞漿為酸性,與堿性染料美藍(lán)或天青結(jié)合,染紫藍(lán)色,稱為嗜堿性物質(zhì);中性顆粒呈等電狀態(tài)與伊紅和美藍(lán)均可結(jié)合,染淡紫色,稱為中性物質(zhì)。
Giemsa Stain(1:9)由 10×儲存液和磷酸鹽緩沖液組成,1:9 混合成工作液后
使用;亦可以分開使用,即先用 Giemsa Stain 染色,再經(jīng)磷酸鹽緩沖液處理,亦可以得到
滿意的染色效果。
產(chǎn)品組成:
100ml 500ml
試劑(A): Giemsa Stain 儲存液(10×) 10ml 50ml RT 避 光
試劑(B): 磷酸鹽緩沖液 100ml 500ml RT
自備材料:
1、 載玻片、顯微鏡
2、 蒸餾水
3、 甲醇
4、 0.1~0.5%乙酸
操作步驟(僅供參考):
(一)一步法涂片染色
1、Giemsa 工作液的配制:
按試劑(A):試劑(B)=1:9 混合,即取1份 Giemsa Stain 儲存液(10×)加入到9份的磷酸鹽緩沖液中充分混勻,即為Giemsa 工作液,為即用型試劑,不易保存,即用即配。
2、常規(guī)方法制備血液涂片或骨髓涂片,待涂片自然干燥后,用甲醇固定 1~3min。
3、將血液涂片或骨髓涂片置于染色架上,滴加 Giemsa 工作液覆蓋涂片,室溫滴染 15~ 30min。
4、用自來水或蒸餾水緩慢從玻片一端沖洗。
5、干燥、鏡檢。
染色結(jié)果:
嗜酸性顆粒 粉紅色
嗜堿性顆粒 紫藍(lán)色
中性顆粒 淡紫色
(二)兩步法涂片染色
1、Giemsa 工作液的配制:
粉紅色紫藍(lán)色淡紫色按試劑(A):蒸餾水=1:4 混合,即取1 份的 Giemsa Stain 儲存液(10×)加入到 4 份的蒸餾水中充分混勻,即為 Giemsa 工作液。Giemsa 工作液為即用型試劑,不易保存,即用即配。
2、常規(guī)方法制備血液涂片或骨髓涂片,待涂片自然干燥后,用甲醇固定 1~3min。
3、將血液涂片或骨髓涂片置于染色架上,滴加適量 Giemsa 工作液覆蓋涂片,室溫滴染
10~15min。
4、加入等量磷酸鹽緩沖液,輕輕晃動(dòng)載玻片,室溫靜置 5~10min。
5、用自來水或蒸餾水緩慢從玻片一端沖洗。
6、干燥、鏡檢。
染色結(jié)果: 嗜酸性顆粒 粉紅色
嗜堿性顆粒 紫藍(lán)色
中性顆粒 淡紫色
(三)組織切片染色
1、Giemsa 工作液的配制:
粉紅色紫藍(lán)色淡紫色按試劑(A):試劑(B) =1:9 混合,即取 1 份 Giemsa Stain 儲存液(10×)加入到 9 份磷酸鹽緩沖液中充分混勻,即為 Giemsa 工作液。Giemsa 工作液為即用型試劑,不易保存,即用即配。
2、新鮮組織立即置于 Regaud 固定液固定 2 天,期間應(yīng)更換 1 次固定液。
3、3%重鉻酸鉀固定 1 天。
4、流水沖洗 16 個(gè)小時(shí)或過夜。
5、照常規(guī)脫水、包埋。
6、切片厚度約為 5μm,常規(guī)脫蠟至水。
7、蒸餾水清洗 2 次,每次 1min。
8、入含 Giemsa 工作液染缸,浸染 18~24h。
9、蒸餾水稍微清洗。
10、0.1~0.5%乙酸洗 1~2min。
11、自來水稍沖洗。
12、用無水乙醇迅速脫水 3 次,每次 5~10s。
13、二甲苯透明,中性樹脂封固。
染色結(jié)果:
細(xì)胞核 藍(lán)色至紫色
細(xì)胞質(zhì) 淡藍(lán)色
嗜鉻細(xì)胞胞質(zhì) 黃綠色
結(jié)締組織 淡紅色
注意事項(xiàng):
1、血液涂片或骨髓涂片應(yīng)厚薄均勻,以免影響染色效果。
2、涂片染色中 Giemsa 染色后,請勿先去除染液或直接對涂片用力沖洗。
3、如果染色過深或過淺,應(yīng)調(diào)整染色時(shí)間或工作液濃度。
4、涂片染色和組織切片染色中,pH 值對染色有一定影響,載玻片應(yīng)清潔、無酸堿污染,以免影響染色效果。
5、染色液經(jīng)稀釋后液面應(yīng)金屬光澤則表示染液有染色作用,否則染色液可能失效。
6、組織切片染色中,染色后需用大量 0.1~0.5%乙酸急速?zèng)_洗,避免浮面沉淀物污染切片后難以洗脫。
7、0.5%乙酸分化常用于 Giemsa 組織切片染色,如有必要亦可用于細(xì)胞涂片,但其濃度應(yīng)適量下調(diào)。0.5%乙酸分化切片時(shí),切片呈粉紅色即可終止。
8、Giemsa 組織切片染色中,無水乙醇脫水要迅速,否則切片易褪色。
9、涂片染色和組織切片染色中,如需急速獲得結(jié)果,可按 Giemsa Stain儲存液(10×):磷酸鹽緩沖液=1:1 配制 Giemsa 工作液,充分混勻,即為快速 Giemsa 染色工作液,將染色液滴加于細(xì)胞涂片或組織切片上,加熱染色,20~30s 后重新加染色液,反復(fù) 5~10 次,其余步驟同上。
10、染色液可重復(fù)使用,但不能多次重復(fù),若有沉淀物應(yīng)過濾后使用。
11、Regaud 固定液: 按3%重鉻酸鉀: 甲醛=4:1 配制,臨用前混勻,1~2 天后失效。
有效期:24 個(gè)月有效。