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ACK紅細(xì)胞裂解液(ACK Lysis Buffer)

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更新時間:2018-12-25 22:48:12瀏覽次數(shù):1618次

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ACK Lysis Buffer 經(jīng)過優(yōu)化配方,在裂解無核紅細(xì)胞的同時幾乎不損傷淋巴細(xì)胞(Lymphocyte)或其它有細(xì)胞核的細(xì)胞

產(chǎn)介:

ACK 紅細(xì)胞裂解液(ACK Lysis Buffer)

 

在生物科研領(lǐng)域,經(jīng)常需要去除紅細(xì)胞,去除紅細(xì)胞的方法有多,如  ACK   Lysis Buffer、Tris-銨紅細(xì)胞裂解液、Gey's Lysis BufferACK 紅細(xì)胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer)也稱 ACK Lysis Buffer,是一從人、鼠或其他哺乳物等體內(nèi)的組織樣品或血液中裂解并去除無核紅細(xì)胞的溶液,其主要有效成分NH4Cl。

ACK Lysis Buffer 經(jīng)過優(yōu)化配方,在裂解無核紅細(xì)胞的同幾乎損傷淋巴細(xì)(Lymphocyte)或其它有細(xì)胞核的細(xì)胞。于裂解、去除有細(xì)胞核紅細(xì)胞,例如或禽

紅細(xì)胞,效果佳,裂解細(xì),采用。本裂解液經(jīng)過濾除菌,經(jīng)過 ACK Lysis Buffer 的血液或組織細(xì)品可以用于后續(xù)細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞融合以及核酸或蛋白的提取及各規(guī)的分析和檢測。

產(chǎn)成:

ACK Lysis Buffer    100ml     500ml      4℃

 

材料:

1、 胰蛋白

2、 離心機

3、 PBS、HBSS、生理水或無血清培養(yǎng)

 

操作步驟(供參考)

(一)組織細(xì)本的常規(guī)操作

1、制備細(xì): 鮮組織經(jīng)過胰蛋白或膠原等消化理,通適當(dāng)方法制細(xì)

液,離心棄上清。

2、裂解: 加入 35 細(xì)胞沉淀體ACK Lysis Buffer,柔吹打混勻,裂解 12min。本操作步驟4℃條件下操作更佳,亦可在室溫下操作。

3、離心: 4℃,400500g 離心 5min,棄色上清。如無低溫離心機,本步驟亦可在室溫下操作。

4、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解*,可以重復(fù)上述步驟 2 步驟 3 各一次。

5、洗:根據(jù)實驗要求加入適量 PBS、HBSS、生理水或無血清培養(yǎng)液,柔混勻重

沉淀。4℃400500g 離心 23min,棄上清,離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的 PBS、HBSS、生理水或無血清培養(yǎng)液的量一般應(yīng)大于細(xì)胞沉淀體5 倍以上。

6、如有必要,重復(fù)上述步驟 5 一次,共洗12 次。

7、根據(jù)實驗需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀,數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實驗

(二)組織細(xì)本的快速操作(無需洗)

1、制備細(xì)液:新鮮組織經(jīng)過胰蛋白或膠原等消化理,通適當(dāng)方法制細(xì)

液,離心棄上清。

2、裂解:加入細(xì)5 細(xì)胞沉淀體ACK Lysis Buffer,柔吹打混勻,裂解 12min本操作步驟4℃條件下操作更佳,亦可在室溫下操作。

3、加入 1520ml PBSHBSS、生理水或無血清培養(yǎng)液,柔混勻。

4、離心:4℃400500g 離心 5min,棄色上清,本離心步驟亦可在室溫下操作。

5、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解*,可以重復(fù)上述步驟 24 各一次。

6、根據(jù)實驗需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀,數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。

(三)血液本的常規(guī)操作

1、取新抗凝血,400500g 離心 5min,棄上清。

2、裂解: 加入 610 細(xì)胞沉淀體ACK Lysis Buffer柔吹打混勻,裂解 15min。本操作步驟4℃條件下操作更佳,亦可在室溫下操作。(提醒:于鼠的血液,裂解 12min  經(jīng),于人的外周血,宜延裂解時間至  45min,并且裂解程中輕輕搖動 以促進紅細(xì)胞裂解。)

3、離心: 4℃,400500g 離心 5min,棄色上清。如無低溫離心機,本步驟亦可在室溫下操作。

4、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解*,可以重復(fù)上述步驟 2 步驟 3 一次。

5、洗: 根據(jù)實驗要求加入適量 PBS、HBSS、生理水或無血清培養(yǎng)液,柔混勻重沉淀。4℃400500g 離心 23min,棄上清,離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的PBS、HBSS、生理水或無血清培養(yǎng)液的量一般應(yīng)大于細(xì)胞沉淀體5 倍以上。

6、根據(jù)實驗需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀,數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。

注意: 于微量或少量的血液本,可以用第 1 操作,可直接加入 10 倍血液體ACK Lysis Buffer 行第 2 操作,并在 4℃或室溫裂解 415min于鼠的血液,裂45min 經(jīng); 于人的外周血,宜延裂解時間10min,但通常宜超15min,并且裂解程中宜適當(dāng)搖動以促進紅細(xì)胞裂解。

(四)血液本的快速操作(無需洗)

1、新抗凝血中加入 10 倍體ACK Lysis Buffer,輕輕吹打混勻,裂解 415min。本操作步驟4℃條件下操作更佳,亦可在室溫下操作。(特提醒:于鼠的血液,裂解 45min 經(jīng)于人的外周血,宜延裂解時間10min,但通常宜超15min,并且裂解程中宜適當(dāng)搖動以促進紅細(xì)胞裂解。)

2、加入 2030ml PBS、HBSS、生理水或無血清培養(yǎng)液,柔混勻。

3、400500g 離心 5min,棄色上清。4℃離心效果更佳。

4、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解*,可以重復(fù)上述步驟 2 步驟 3 一次。

5、根據(jù)實驗需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀,數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。

注意事

1、制備細(xì)時應(yīng)根據(jù)實驗需要,一定要制單細(xì)液。

2、后續(xù)試驗如果是用于細(xì)胞培養(yǎng),操作程中應(yīng)注意無菌操作,盡量在超工作臺內(nèi)操作。

3、離心步驟盡量在 4℃離心機上操作。

4、常規(guī)步驟不快速步驟的區(qū)在于:常規(guī)步驟多了一滌過程的離心,可以節(jié)省洗液  的用量,并且洗效果也更好,需要大體的離心管;快速步驟少了一次離心程,洗滌    效果略差一些,同需要大體的離心管。

5、離心洗后,通常極微量的紅細(xì)會影響后續(xù)檢測。

6、如果經(jīng)過 ACK Lysis Buffer 理后的品后續(xù)用于RNA 的提取,在細(xì)必使用 DEPC 理的溶液,即無需在操作中特意去除 RNase

7、了您的安全和健康,穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期: 12 個月有效。

碘代硫代乙酰膽堿

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