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上海研謹(jǐn)生物科技有限公司

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SILAC代謝標(biāo)記定量實(shí)驗(yàn)服務(wù)

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更新時(shí)間:2020-03-23 11:25:29瀏覽次數(shù):2104次

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產(chǎn)地類別 國(guó)產(chǎn) 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)
提供商: 上海研謹(jǐn)生物
服務(wù)名稱: SILAC代謝標(biāo)記定量實(shí)驗(yàn)服務(wù)
規(guī)格: 實(shí)驗(yàn)服務(wù)
價(jià)格: 500元
收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果:
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SILAC代謝標(biāo)記定量實(shí)驗(yàn)服務(wù)

 

實(shí)驗(yàn)技術(shù)簡(jiǎn)介: SIL AC的基本原理是分別用天然同位素(輕型)或穩(wěn)定同位素(重型)標(biāo)記的必需氨基酸取代細(xì)胞培養(yǎng)基中相應(yīng)氨基酸,細(xì)胞經(jīng)5-6個(gè)倍增周期后,穩(wěn)定同位素標(biāo)記的氨基酸*摻入到細(xì)胞新合成的蛋白質(zhì)中替代了原有氨基酸。不同標(biāo)記細(xì)胞的裂解蛋白按細(xì)胞數(shù)或蛋白量等比例混合,經(jīng)分離、純化后進(jìn)行質(zhì)譜鑒定,根據(jù)一級(jí)質(zhì)譜圖中兩個(gè)同位 素型肽段的面積比較進(jìn)行相對(duì)定量。屬于體內(nèi)代謝標(biāo)記法。

實(shí)驗(yàn)操作流程:

1、蛋白提取和樣品制備

2、標(biāo)記效率測(cè)試

3、樣品混臺(tái)

4、SDS-PAGE分級(jí)

5、酶解

6、質(zhì)譜鑒定

7、軟件分析

8、定性定量蛋白質(zhì)組結(jié)果

9、生物信息學(xué)數(shù)據(jù)挖掘和統(tǒng)計(jì)分析

 

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):

客戶提供:

1、蛋白質(zhì)提取物: 濃度>1μg/ul, 蛋白質(zhì)總量>300μg.

2、細(xì)胞:通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)取不少于2x106個(gè)細(xì)胞于EP管,加入0 5ml生理鹽水或蛋白保護(hù)劑,混勻后保存于冰箱(-80°C, 避免反復(fù)凍融)。

交付標(biāo)準(zhǔn):

1、蛋白質(zhì)鑒定和SIL AC定量分析結(jié)果;

2、客戶蛋白質(zhì)對(duì)應(yīng)的質(zhì)譜峰圖;

3、SIL AC實(shí)驗(yàn)完整的實(shí)驗(yàn)步驟、使用儀器、軟件檢索參數(shù)等。

其他:

1、SILAC是體內(nèi)標(biāo)記技術(shù),穩(wěn)定同位素標(biāo)記的氨基酸與天然氨基酸化學(xué)性質(zhì)基本相同,所標(biāo)記的細(xì)胞和未標(biāo)記細(xì)胞在生物學(xué)行為上幾乎沒(méi)有差異,標(biāo)記效率可高達(dá)100%。

2、采用質(zhì)譜定量,定量結(jié)果準(zhǔn)確且批次變異小、重復(fù)性好。

3、體內(nèi)代謝標(biāo)記與SDS- PAGE或色譜分離技術(shù)相結(jié)合,兼容疏水性蛋白和偏堿性蛋白,不受蛋白性質(zhì)限制。

4、多個(gè)樣品混合后同時(shí)進(jìn)行分離、酶切和鑒定,后續(xù)實(shí)驗(yàn)對(duì)樣品的影響一致, 減少了實(shí)驗(yàn)操作和儀器設(shè)備產(chǎn)生的影響。

5、由于該技術(shù)屬于體內(nèi)標(biāo)記,標(biāo)記效果穩(wěn)定,其標(biāo)記效率不受裂解液的影響,不僅適合于進(jìn)行全細(xì)胞蛋白的分析,還適合于膜蛋白的鑒定和定量。

6、與化學(xué)標(biāo)記相比,SIL AC方法蛋白需要量明顯減少,通常每個(gè)樣品只需要幾十微克的蛋白量。

7、活體標(biāo)記,更接近樣品真實(shí)狀態(tài)。

8、只適用于活體培養(yǎng)的細(xì)胞,對(duì)于生物醫(yī)學(xué)研究中常用的組織樣品,體液樣品等無(wú)法分析,對(duì)于動(dòng)物模型的標(biāo)記成本太大,無(wú)法實(shí)現(xiàn)。與體外標(biāo)記技術(shù)相比,SIL AC屬于體內(nèi)標(biāo)記,具有以下技術(shù)優(yōu)勢(shì)

1、高通量,可同時(shí)鑒定并定量數(shù)百至數(shù)千種蛋白質(zhì);

2、定量精確,降低由于樣品制備不同而造成的實(shí)驗(yàn)差異;

3、線性定量范圍廣;

4、靈敏度更高,蛋白質(zhì)需要量明顯減少;

5、標(biāo)記采用的是體內(nèi)標(biāo)記技術(shù),更接近樣品真實(shí)狀態(tài)。

SILAC技術(shù)服務(wù)內(nèi)容

1、細(xì)胞同位素標(biāo)記;

3、SDS-PAGE分離;

4、胰酶酶切后液相分離和質(zhì)譜分析;

5、數(shù)據(jù)庫(kù)檢索及蛋白質(zhì)定量分析;

6、差異蛋白的生物信息學(xué)分析;

7、實(shí)驗(yàn)報(bào)告提交。

實(shí)驗(yàn)服務(wù)報(bào)告內(nèi)容

1、蛋白定鑒定和SIL AC定量分析結(jié)果;

2、顧客蛋白質(zhì)對(duì)應(yīng)的質(zhì)譜峰圖;

3、SIL AC實(shí)驗(yàn)完整的實(shí)驗(yàn)步驟、使用儀器、軟件檢索參數(shù)等。

技術(shù)服務(wù)優(yōu)勢(shì)

1、靈敏度高,檢測(cè)限低,可檢測(cè)出低豐度蛋白;

2、分離能力強(qiáng),分析范圍廣,iITRAQ可以對(duì)任何類型的蛋白質(zhì)進(jìn)行分離鑒定,包括高分子量蛋白質(zhì)、酸性蛋白和堿性蛋白,膜蛋白和不溶性蛋白;

3、高通量:同時(shí)對(duì)8個(gè)樣本進(jìn)行分析,提高了實(shí)驗(yàn)通量,可同時(shí)對(duì)多個(gè)時(shí)間點(diǎn)或不同處理的蛋白質(zhì)進(jìn)行分析;

4、結(jié)果可靠:定性與定量分析結(jié)果更加可靠;

5、自動(dòng)化程度高:液相與質(zhì)譜連用,自動(dòng)化操作,分析速度快,分離效果好。

 

 

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

ELISA試劑盒免費(fèi)代檢測(cè)

CCK8檢測(cè)

基因組DNA提取

 

蛋白相互作用分析

Western Blot

 

免疫組化

熒光定量PCR

動(dòng)物模型服務(wù)

流式細(xì)胞檢測(cè)

細(xì)胞增殖

激光共聚焦

DNA甲基化實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞劃痕

鈣離子濃度檢測(cè)

掃描電鏡實(shí)驗(yàn)

microRNA 測(cè)序

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

Taqman探針

ATP/ADP檢測(cè)

 

石蠟/冰凍切片

定點(diǎn)突變

線粒體膜電位(MMP)檢測(cè)

細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的測(cè)定

藥理毒理動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

 

免疫共沉淀

真核表達(dá)載體構(gòu)建

染色質(zhì)免疫沉淀CHIP

非標(biāo)定量(Label-free)實(shí)驗(yàn)

平行反應(yīng)監(jiān)測(cè)技術(shù)(PRM) 代做服務(wù)

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SILAC代謝標(biāo)記定量實(shí)驗(yàn)服務(wù)

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蛋白雙向2D-WB電泳實(shí)驗(yàn)服務(wù)

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