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      種子發(fā)芽率是指在最適宜條件下，在規(guī)定天數(shù)內，發(fā)芽的種子占供試種子的百分數(shù)。它是決定種子品質和實用價值大小的主要依據(jù)，與播種時的用種量直接有關。但是常規(guī)方法（直接發(fā)芽）測定發(fā)芽率所需時間較長，特別是有時為了應急需要，沒有足夠的時間來測定發(fā)芽率，遇到休眠種子也無法知道?？焖贉y定法則能在較短時間內獲得結果。

Ⅰ．氯化三苯四氮唑法（ TTC法）

原理

　　凡有生命活力的種子胚部，在呼吸作用過程中都有氧化還原反應，而無生命省略的種胚則無此反應。當TTC滲入種胚的活細胞內，并作為氫受體被脫氫輔酶（NADH2 或NADPH2 ）上的氫還原時，便由無色的TTC變?yōu)榧t色的三苯基甲（TTF）。

儀器藥品

　　光照培養(yǎng)箱 　 燒杯

　　培養(yǎng)皿 　　　鑷子

　　刀片 　　　　天平

　　0.5% TTC溶液：稱取0.5g TTC放在燒杯中，加入少許95%乙醇使其溶解，然后用蒸餾水稀釋至100ml。溶液避光保存，若變紅色，即不能再用。

操作步驟

　　1．浸種

　　將待測種子在30─35℃溫水中浸種（大麥、小麥、秈谷6─8小時，玉米5小時左右，粳谷2小時），以增強種胚的呼吸強度，使顯色迅速。

　　2．顯色

　　取吸脹的種子200粒，有刀片沿種子胚的中心線縱切為二半，將其中的一半置于2只培養(yǎng)皿中，每皿100個半粒，加入適量的0.5% TTC，以覆蓋種子為度。然后置于30℃光照培養(yǎng)箱中0.5─1小時。觀察結果，凡胚被染為紅色的是活種子。

　　將另一半在沸水中煮5分鐘殺死胚，作同樣染色處理，作為對照觀察。

　　3．計算活種子的百分率，如果可能的話與實際發(fā)芽率作一比較，看是否相符？

Ⅱ．溴麝香草酚藍法（ BTB法）

原理

　　凡活細胞必有呼吸作用，吸收空氣中的O2 ，放出CO2 。CO2 溶于

增加，可用溴麝香草酚藍（BTB）來測定酸度的改變。BTB的變色范圍為pH6.0─7.6，酸性呈黃色，堿性呈藍色，中間經(jīng)過綠色（變色點為pH7.1）。色澤差異顯著，易于觀察。

儀器藥品

　　光照培養(yǎng)箱　 天平

　　培養(yǎng)皿　　　 燒杯

　　鑷子 　　　　漏斗

　　濾紙　　　　 洋菜

　　0.1%BTB溶液：稱取BTB0.1g，溶解于煮沸過的自來水中（配制指示劑的水應為微堿性，使溶液呈藍色或藍綠色，蒸餾水為微酸性不宜用），然后用濾紙濾去殘渣。濾液若呈黃色，可加數(shù)滴稀氨水，使之變?yōu)樗{色或藍綠色。此液貯于棕色瓶中可長期保存。

　　1%BTB瓊脂凝膠：取0.1%BTB溶液100ml置于燒杯中，將瓊脂剪碎后加入，用小火加熱并不斷攪拌。待瓊脂溶解后，趁熱倒在數(shù)個干潔的培養(yǎng)皿中，使成一均勻的薄層，冷卻后備用。

操作步驟

　　1．浸種

　　 同上述TTC法。

　　2．顯色

　　取吸脹的種子200粒，整齊地埋于準備好的瓊脂凝膠培養(yǎng)皿中，種子平放，間隔距離至少1cm。然后將培養(yǎng)皿置于30─35℃光照培養(yǎng)箱下培養(yǎng)2─4小時，在藍色背景下觀察，如種胚附近呈現(xiàn)較深黃色暈圈是活種子，否則是死種子。

　　用沸水殺死的種子作同樣處理，進行對比觀察。

　　3．計數(shù)種胚附近出現(xiàn)黃色暈圈的活種子數(shù)，算出發(fā)芽率。

Ⅲ ．紅墨染色法

原理

　　凡生活細胞的原生質膜具有選擇性吸收物質的能力，而死的種胚細胞原生質膜喪失這種能力，于是染料便能進入死細胞而染色。

儀器藥品

　　1．浸種

　　同上述TTC法。

　　2．染色

　　取已吸脹的種子200粒，沿胚的中線切為兩半，將一半置于培養(yǎng)皿中，加入5%紅墨水（以淹沒種子為度），染色10梍15分鐘（溫度高時間可短些）。染色后倒去紅墨水，用水沖洗多次，至沖洗液無色為止。檢查種子死活，凡種胚不著色或著色很淺的為活種子；凡種胚與胚乳著色程度相同的為死種子?？捎梅兴畾⑺赖姆N子作對照觀察。

　　3．計數(shù)種胚不著色或著色淺的種子數(shù)，算出發(fā)芽率。

Ⅳ．紙上熒光法

原理

　　具有生活力的種子和已經(jīng)死亡的種子，它們的種皮對物質的透性是不同的，而許多植物的種子中又都含有熒光物質。利用對熒光物質的不同透性來區(qū)分種子的死活，方法簡單，特別是對十字花科植物的種子，尤為適用。

儀器藥品

　　紫外熒光燈　　 培養(yǎng)皿

　　鑷子　　　　　 濾紙（無熒光）

操作步驟

　　1．將完整無損的種子（油菜、白菜等十字花科植物的種子100粒，于25─30℃水中浸泡2─3小時。

　　2．把已吸脹的種子，以3─5mm間隔整齊地排列在培養(yǎng)皿中的濕濾紙上，濾紙上水分不能過多，以免熒光物質流散彼此影響。培養(yǎng)皿可以不必加蓋，放置1.5─2小時，取去種子，將濾紙陰干。取出的種子仍按原來順序排列在另一培養(yǎng)皿中（以備驗證）。

　　3．將陰干的濾紙置于紫外熒光燈下進行觀察，觀察如能在暗室中進行，則效果更好。

　　4．在放過種子的位置上如見到熒光圈，則為死種子。如要確證它們是死種子，可將排列在另一培養(yǎng)皿中的這些種子揀出來，集中在一只培養(yǎng)皿的濕濾紙上，而讓不產生熒光圈的種子留在培養(yǎng)皿中，維持濕度，讓其自然發(fā)芽。

　　5．3─4天后記錄培養(yǎng)皿中發(fā)芽種子數(shù)，填入下表中。

　　此方法的成敗，首先決定于種子中熒光物質的存在，其次決定于種皮的性質。有些種子無論有無發(fā)芽能力，一經(jīng)浸泡，即有熒光物質透出，大豆即屬此類；

也有些種子由于種皮的不透性，無論種子死活，都不產生熒光圈，許多植物的種子都會碰到這種個別現(xiàn)象，此時只有用機械方法擦傷種皮，可重行驗證。相反，有時由于收獲時受潮，種皮已破裂，也會產生熒光圈，試驗時都應該注意。最好將浸泡液進行檢查，沒有熒光則適于作試驗材料。

• 微生物培養(yǎng)光照培養(yǎng)箱

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