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化工儀器網(wǎng)>產(chǎn)品展廳>生命科學(xué)儀器>組織學(xué)設(shè)備>切片和解剖設(shè)備> 石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡實(shí)驗(yàn)周期及交付標(biāo)準(zhǔn)

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石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡實(shí)驗(yàn)周期及交付標(biāo)準(zhǔn)

參考價(jià) 15
訂貨量 ≥1
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

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   公司承接各種實(shí)驗(yàn)代做外包服務(wù):石蠟包埋、免疫組化、HE染色、PAS染色、DNA提取、RNA提取、探針、SNP檢測、WB、EMSA、CCK8檢測、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期檢測、流式、質(zhì)粒轉(zhuǎn)染、ROS活性氧檢測、線粒體膜電位檢測、平板克隆、軟瓊脂克隆、細(xì)胞劃痕、細(xì)胞粘附,并為廣大科研用戶提供各種高品質(zhì)的高*_端化學(xué)試劑、生物學(xué)試劑、免疫學(xué)檢測,ELISA試劑盒(免費(fèi)代測)、生化試劑盒、分析標(biāo)準(zhǔn)品、對照品、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、食品安全檢測試劑、動物疫病類檢測產(chǎn)品、獸藥殘留檢測試劑、細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù)等,應(yīng)用覆蓋藥物分析領(lǐng)域、食品安全領(lǐng)域、聚合物研究領(lǐng)域、環(huán)境監(jiān)測領(lǐng)域,客戶廣泛分布于食品、制藥、第三方檢測、環(huán)境測試機(jī)構(gòu)、化工、科研院校、生物工程等行業(yè)。


主營:

1生化試劑、標(biāo)準(zhǔn)品對照品、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、

2.ELISA試劑盒、分離液、分離液試劑盒

3.細(xì)胞:*細(xì)胞、國產(chǎn)腫瘤細(xì)胞、國產(chǎn)正常細(xì)胞、腫瘤耐藥細(xì)胞

4.食品安全檢測試劑、動物疫病類檢測產(chǎn)品、獸藥殘留檢測試劑

5.耗材:常用實(shí)驗(yàn)耗材、移液器


各種實(shí)驗(yàn)代做:WB代做,免疫組化,PCR代做,細(xì)胞檢測,食品安全檢測試劑,獸藥殘留檢測試劑,動物疫病類檢測,銷售高品質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品,對照品,ELISA試劑盒,細(xì)胞,血清,等等

應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)

TUNEL凋亡顯色法

TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法檢測細(xì)胞凋亡的原理是當(dāng)細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí),DNA內(nèi)切酶被激活,核小體間的基因組DNA被切斷,暴露的3'-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)

加上帶有生物素(Biotin) 標(biāo)記的dUTP即Bitin-dUTP.,隨后于辣根過氧化物酶 (HRP) 標(biāo)記的streptavidin結(jié)合, 在HRP的催化下通過DAB顯色來顯示凋亡細(xì)胞,從而可以通過普通光學(xué)顯微鏡檢測到細(xì)胞凋亡。


實(shí)驗(yàn)意義

1. TUNEL法是一種分子生物學(xué) 與形態(tài)學(xué)相結(jié)合的研究方法,可對完整的單個(gè)凋亡細(xì)胞或者凋亡小體進(jìn)行原位染色,可以準(zhǔn)確反映細(xì)胞凋亡典型的生物化學(xué)和形態(tài)特征。

2.可用于石蠟切片冰凍切片培養(yǎng)的細(xì)胞等進(jìn)行細(xì)胞凋亡檢測,靈敏度遠(yuǎn)比一般的組織化學(xué)和生物化學(xué)方法要高。

3.操作簡便快捷,在細(xì)胞凋亡的研究中被廣泛采用。


實(shí)驗(yàn)步驟


1.石蠟切片TUNEL顯色法:

①石蠟切片常規(guī)脫蠟至水,脫蠟劑二甲苯,至水劑乙醇;

②PBS漂洗3*5 min; .

③加入蛋白酶K工作液37°C反應(yīng)15-30 min, PBS漂洗3x5 min;

④4%多聚甲醛(pH7 .4的PBS)室溫固定15-30 min, PBS漂洗3x5 min;

⑤浸入封閉液(3%H202)室溫封閉10 min, PBS漂洗3x5 min;

⑥加入適量TdT酶反應(yīng)液,暗濕盒中37°C反應(yīng)1 h,用SSC室溫15 min終止反應(yīng)后,PBS漂洗3x5 min; .

⑦浸入0.3% H202封閉內(nèi)源性過氧化物酶活性,室溫孵育3-5 min, PBS漂洗3x5 min;

⑧滴加Streptavidin-HRP工作液,37*C反應(yīng)30-60 min, PBS漂洗3x5 min;

⑨滴加DAB顯色液后用去離子水漂洗數(shù)次;

10.選擇是否用DAPI復(fù)染細(xì)胞核;

脫水、透明、中性樹膠封片后進(jìn)行觀察。


2.冰凍切片TUNEL顯色法:

①新鮮組織經(jīng)處理后,立即在恒冷冰凍切片機(jī)內(nèi)切片,厚度為5~6 um;

②防脫玻片,貼片,室溫陰干約12 h;

③4%多聚甲醛(pH7 4的PBS)室溫固定10 min, PBS漂洗3x5 min;

④浸入封閉液(3%H202)室溫封閉10 min, PBS漂洗3x5 min;

⑤浸入邇透液(0.1% Triton X-100溶于PBS中),室溫通透30 S-2 min;

⑥加入適量TdT酶反應(yīng)液,暗濕盒中37°C反應(yīng)1 h,用SSC室溫15 min終止反應(yīng)后,PBS漂洗3x5 min; .

⑦浸入0.3% H2O2封閉內(nèi)源性過氧化物酶活性,室溫孵育3-5 min, PBS漂洗3x5 min;

⑧滴加Streptavidin-HRP工作液,379C反應(yīng)30-60 min, PBS漂洗3x5 min;

⑨滴加DAB顯色液后用去離子水漂洗數(shù)次:

@選擇是否用DAPI復(fù)染細(xì)胞核;

脫水、透明、中性樹膠封片后進(jìn)行觀察。


實(shí)驗(yàn)完成周期及交付標(biāo)準(zhǔn)

1.實(shí)驗(yàn)周期: 1-2周

2.交付標(biāo)準(zhǔn):蠟塊、切片、染色圖片.實(shí)驗(yàn)報(bào)告(實(shí)驗(yàn)步驟、試劑、耗材等)


需確認(rèn)的信息

1.樣本的種屬.

2.樣本的類型(固定的組織or蠟塊or切片)

3.是否提供試劑盒

4.拍照要求


收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)服務(wù)周期提供結(jié)果:

歡迎咨詢詳談,我們會根據(jù)您的方案及需求制定詳細(xì)的服務(wù)協(xié)議。

更多實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)請瀏覽網(wǎng)站其他內(nèi)容,或來電詢!

2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)外包及論文潤色服務(wù),協(xié)助客戶各類實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤色十多年,是您值得信賴的科研合作伙伴!

如果您受時(shí)間、試驗(yàn)條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

 

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

 




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