10154ES PCR高保真酶預(yù)混液(含染料) PCR Master Mix
- 公司名稱 翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 品牌Yeasen/翌圣生物
- 型號(hào)10154ES
- 所在地上海市
- 廠商性質(zhì)生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間2024/9/4 17:02:22
- 訪問(wèn)次數(shù) 578
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,制藥 |
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix (With Dye)是即用型2×預(yù)混合溶液,包含Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase,dNTPs以及優(yōu)化的緩沖體系。預(yù)混液中添加了常溫可抑制聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性的兩種單克隆抗體,可簡(jiǎn)便地進(jìn)行高特異性的Hot Start PCR。預(yù)混液中添加了延伸因子使得該酶具有長(zhǎng)片段擴(kuò)增能力,擴(kuò)增目的片段的長(zhǎng)度可長(zhǎng)達(dá)13 kb,該酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性,其保真性是Taq DNA聚合酶的83倍,是普通Pfu DNA聚合酶的9倍。適用于復(fù)雜模板的擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物為平末端。
2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix (With Dye)具有快速簡(jiǎn)便、靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn),反應(yīng)體系只需加入引物和模板即可,并可以通過(guò)兩步法的程序進(jìn)行擴(kuò)增,簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)步驟,節(jié)省了時(shí)間。本產(chǎn)品中含有電泳指示染料,PCR產(chǎn)物可直接進(jìn)行電泳。另外,該產(chǎn)品還含有特異保護(hù)劑,使得預(yù)混液反復(fù)凍融后仍可維持穩(wěn)定活性。
產(chǎn)品信息
貨號(hào) | 10154ES01 / 10154ES03 / 10154ES08/10154ES60 |
規(guī)格 | 100 μL / 1 mL / 5×1 mL/100×1 mL |
儲(chǔ)存條件
-25~-15℃保存,有效期1年。
使用說(shuō)明
推薦PCR反應(yīng)體系
組分 | 體積(μL) | 終濃度 |
RNase-free ddH2O | to 50 μL | - |
DNA模板*** | 適量 | - |
Forward Primer (10 μM)** | 2 μL | 0.4 μM |
Reverse Primer (10 μM)** | 2 μL | 0.4 μM |
2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix (With Dye)* | 25 μL | 1× |
*在終濃度1×預(yù)混液含有1 U/50 μL的聚合酶、2 mM Mg2+和200 μM的dNTPs。
** PCR反應(yīng)體系中引物終濃度的范圍為0.2-1 μM,推薦0.4 μM。
***不同模板的推薦使用量(25 μL反應(yīng)體系):
模板種類(lèi) | 擴(kuò)增片段1 kb-10 kb |
基因組DNA | 50 ng-200 ng |
質(zhì)粒或病毒DNA | 10 pg-20 ng |
cDNA | 1-2.5 μL(不超過(guò)PCR反應(yīng)總體積的1/10) |
推薦PCR擴(kuò)增程序
兩步法程序(優(yōu)先推薦)
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 98℃ | 3 min | 1 |
變性 | 98℃ | 10 sec | 30-35 |
延伸 | 68℃ | 30 sec/kb | |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
2)三步法程序(常規(guī)程序)
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性* | 98℃ | 3 min | 1 |
變性 | 98℃ | 10 sec | 30-35 |
退火** | 60℃ | 20 sec | |
延伸*** | 72℃ | 30 sec/kb | |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
*預(yù)變性溫度和時(shí)間:推薦溫度:98°C,時(shí)間:3 min,高GC含量模板5-10 min。
**退火溫度和時(shí)間:推薦溫度:60°C,也可根據(jù)需要,設(shè)立溫度梯度去摸索引物退火的最適溫度。推薦退火時(shí)間設(shè)置為20 sec,可以在10-30 sec內(nèi)調(diào)節(jié)。退火時(shí)間太長(zhǎng)可能導(dǎo)致擴(kuò)增產(chǎn)物在膠上呈彌散狀。
***延伸溫度和時(shí)間:推薦溫度:72°C。時(shí)間:30 sec/kb,復(fù)雜模板根據(jù)實(shí)際情況可延長(zhǎng)至60 sec/kb。
3)梯度溫度退火程序(難擴(kuò)增基因推薦程序)
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 98℃ | 3 min | 1 |
變性 | 98℃ | 10 sec | 15,每個(gè)循環(huán)降低1℃ |
梯度退火 | 70-55℃ | 20 sec | |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | |
變性 | 98℃ | 10 sec | 20 |
正常退火 | 55℃ | 20 sec | |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
4)不同擴(kuò)增程序下的特點(diǎn)
程序類(lèi)型 | 兩步法 | 三步法 | 梯度退火 |
速度 | 最快 | 中等 | 慢 |
特異性 | 高 | 中等 | 高 |
PCR產(chǎn)量 | 中等 | 最高 | 中等 |
檢出率 | 高 | 中等 | 高 |
注意事項(xiàng)
1. 本產(chǎn)品僅作科研用途。
2. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。