化工儀器網(wǎng)>產(chǎn)品展廳>試劑標(biāo)物>常用實(shí)驗(yàn)試劑>普通試劑>F5560S-200 rxns LabFD PspGI(EcorII) 快速內(nèi)切酶
F5560S-200 rxns LabFD PspGI(EcorII) 快速內(nèi)切酶
| 參考價(jià) | ￥180.00 |
- 公司名稱 北京蘭博利德商貿(mào)有限公司
- 品牌
- 型號(hào)F5560S-200 rxns
- 所在地北京市
- 廠商性質(zhì)代理商
- 更新時(shí)間2023/11/26 21:20:48
- 訪問(wèn)次數(shù) 239
| 200 rxns | 180.00元 | 999 EA可售 |
聯(lián)系方式：?；勖?/b>13810194211 查看聯(lián)系方式
聯(lián)系我們時(shí)請(qǐng)說(shuō)明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息，謝謝!
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 食品,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),制藥 |
|---|
LabFD PspGI(EcorII) 快速內(nèi)切酶
貨號(hào)：F5560S
儲(chǔ)存條件：-20℃
同裂酶：EcoRII，MvaI，BstNI, BciT130I, BseBI, AjnI, Psp6I, Bst2UI
注： 同裂酶對(duì)于不同的甲基化修飾可能具有不同敏感性。
產(chǎn)品組成
產(chǎn)品組成 組分 | 規(guī)格 |
LabFD™ PspGI | 200 μl |
10×LabFD™ Buffer | 2×1 ml |
10×LabFD™ Color Buffer | 2×1 ml |
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
LabFD™快速內(nèi)切酶是一系列經(jīng)過(guò)基因工程重組、能夠在5~15分鐘內(nèi)精確完成DNA切割的高保真限制性內(nèi)切酶，適用于質(zhì)粒DNA、PCR產(chǎn)物或基因組DNA等的快速酶切。LabFD™快速內(nèi)切酶具有如下特點(diǎn)：5~15分鐘內(nèi)即可完成酶切；共用一種酶切Buffer，大大簡(jiǎn)化酶切反應(yīng)體系；良好的酶活冗余度，輕松應(yīng)對(duì)底物過(guò)量或困難模板酶切。此外，LABLEAD去磷酸化、連接試劑在LabFD™酶切Buffer中具有100%活性，支持一管化反應(yīng)，提升“酶切-修飾-連接”的體驗(yàn)。
建議反應(yīng)條件
1×LabFD™緩沖液；
37℃溫育；
參照“DNA快速酶切流程”配制反應(yīng)體系。
失活條件
80℃溫育 20 min。
功能活性檢測(cè)
最適反應(yīng)溫度下，在20ul反應(yīng)體系中，1ul LabFD™PspGI能夠在15min內(nèi)wanquan消化1ugλDNA(Dcm-)。
超長(zhǎng)時(shí)間溫育檢測(cè)
最適反應(yīng)溫度下，將1ul LabFD™ PspGI與1ugλDNA(Dcm-)共同溫育3h，未檢測(cè)到其他核酸酶污染或星號(hào)活性引起的底物非特異性降解，延時(shí)酶切可能出現(xiàn)星號(hào)活性。
酶切-連接-再酶切檢測(cè)
最適反應(yīng)溫度下，使用1ul LabFD™ PspGI消化底物，回收酶切產(chǎn)物。在22℃下使用適量Fast T4 DNA Ligase可以將酶切產(chǎn)物重新連接。將連接產(chǎn)物再次回收后，使用相同的內(nèi)切酶可以重新切開(kāi)連接產(chǎn)物。
非特異性內(nèi)切酶活性檢測(cè)
最適反應(yīng)溫度下，將1ul LabFD™ PspGI與1 μg超螺旋質(zhì)粒 DNA 共同溫育 4 h 后，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，少于10%的質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)變成缺刻或線性狀態(tài)。
使用方法
1. DNA快速酶切流程
1) 在冰上按如下建議的加樣順序配制反應(yīng)體系：
質(zhì)粒DNA | PCR產(chǎn)物 | 基因組DNA | |
ddH2O | 42ul | 34ul | 30ul |
10×LabFD™ Buffer或10×LabFD™ Color Buffer | 5ul | 5ul | 5ul |
底物DNA | 2ul(up to 1ug) | 10ul(~0.2ug) | 10ul(5ug) |
LabFD™ PspGI | 1ul | 1ul | 5ul |
Total | 50ul | 50ul | 50ul |
a. 本體系適用于經(jīng)過(guò)純化的 PCR 產(chǎn)物酶切。未純化的 PCR 產(chǎn)物具備一定的離子強(qiáng)度，DNA 聚合酶同時(shí)具有外切酶活性，會(huì)影響酶切產(chǎn)物，因此如下一步需進(jìn)行克隆 等操作，建議酶切前對(duì) PCR 產(chǎn)物進(jìn)行純化。
2) 輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然后瞬時(shí)離心以收集掛壁液滴；
3) 75℃溫育 15 min（質(zhì)粒），或 15~30 min（PCR 產(chǎn)物），或 30~60 min（基因組 DNA）；
4) 酚氯仿抽提或柱純化（可選）；
5) 如果使用 LabFD™ Color Buffer 進(jìn)行酶切反應(yīng)，得到的產(chǎn)物可以直接進(jìn)行上樣電泳。
2.雙酶切或多酶切
1) 每種快速內(nèi)切酶的用量為1ul，并根據(jù)需要適當(dāng)擴(kuò)大反應(yīng)體系；
2) 所有快速內(nèi)切酶的體積總和不得超過(guò)總反應(yīng)體系的1/10；
3) 如果所用的幾種快速內(nèi)切酶的最適反應(yīng)溫度不同，應(yīng)先以最適溫度低的酶開(kāi)始酶切，再添加最適溫度較高的酶，在其最適反應(yīng)溫度下進(jìn)行酶切反應(yīng)。
3.適用于質(zhì)粒的擴(kuò)大反應(yīng)體系
DNA | 1ug | 2ug | 3ug | 4ug | 5ug |
LabFDTMEcoRI | 1ul | 2ul | 3ul | 4ul | 5ul |
10×LabFD™ Buffer或10×LabFD™ Color Buffer | 5ul | 5ul | 5ul | 5ul | 5ul |
Total | 50ul | 50ul | 50ul | 50ul | 50ul |
注：如果總反應(yīng)體系大于20ul，應(yīng)適當(dāng)增加溫育時(shí)間，盡量使用水浴、金屬浴或沙浴。
不同DNA中的酶切位點(diǎn)數(shù)量
λDNA | ΦX174 | pBR322 | pUC57 | pUC18/19 | SV40 | M13mp18/19 | Adeno2 |
71 | 2 | 6 | 5 | 5 | 17 | 7 | 136 |
甲基化修飾影響
Dam | Dcm | CpG | EcoKI | EcoBI |
無(wú)影響 | 剪切受阻 | 無(wú)影響 | 無(wú)影響 | 無(wú)影響 |
在不同反應(yīng)緩沖液中的活性
LabFD™ Buffer | Thermo Scientific FastDigest Buffer | NEB CutSmart®Buffer | Takara QuickCut™Buffer | |
活性 | 100% | 100% | 100% | 50% |
注：活性數(shù)據(jù)來(lái)自LABLEAD限制酶標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系下的檢測(cè)。
采購(gòu)中心
化工儀器網(wǎng)