產(chǎn)品描述 

ESF 921™昆蟲細胞培養(yǎng)基是一種完整的無血清、無蛋白的培養(yǎng)基，用于穩(wěn)定的細胞生長、蛋白表達和桿狀病毒載體的生產(chǎn)，用于昆 蟲細胞，包括Sf9、Sf21、Tni和果蠅S2。僅供研究使用，不適用于診斷程序。

產(chǎn)品信息

ESF921是一個1倍完整的不用稀釋、即用的培養(yǎng)基。無需添加谷AN酰胺或表面活性劑，如泊洛沙姆188；不推薦使用KANG生素，然而， 必要時，可以使用QING霉素-LIAN霉素（雙抗）或慶DA霉素（三抗）。

安全信息

 請閱讀安全數(shù)據(jù)表（SDS），并遵循操作說明；佩戴適當(dāng)?shù)姆雷o眼鏡、衣服和手套。

培養(yǎng)

培養(yǎng)基： ESF 921

細胞系(s)：Sf9、Sf21、Tni、S2 

培養(yǎng)類型：懸浮培養(yǎng)和貼壁培養(yǎng) 

推薦培養(yǎng)容器：搖瓶或轉(zhuǎn)瓶 

溫度范圍：27°C至28°C 

培養(yǎng)箱：干燥，無二氧化碳環(huán)境。確保適當(dāng)?shù)臍怏w交換，盡量減少培養(yǎng)物暴露在光線下。

細胞對于ESF 921培養(yǎng)基的使用馴化

細胞適應(yīng)ESF 921培養(yǎng)基時，建議使用梯度適應(yīng)。在開始適應(yīng)過程之前，細胞存活率至少要達到95% (Sf9)、93% (Tni)、90%  (Sf21)或85% (S2)，并且生長速度處于細胞分裂對數(shù)生長期。 

1.將細胞傳代至esf921與原始培養(yǎng)基的比例為50:50。在適應(yīng)過程中，按照1 × 個細胞/ mL的原始播種密度接種。 

2.在干燥、無二氧化碳培養(yǎng)箱中以27°C培養(yǎng)，在軌道搖床平臺上以120-140 rpm旋轉(zhuǎn)搖瓶培養(yǎng)物。松開蓋子，允許氣體交換。

3.當(dāng)活細胞數(shù)量為4-6 × 個/ mL時傳代(分裂后3-4天)，按照75:25的比例放入ESF 921原始培養(yǎng)基中。

4.重復(fù)上一步，增加ESF 921與原始培養(yǎng)基的比例（75：25，然后是88：12,95：5），直到使用100% ESF 921。可能需要在一 種比例的情況下傳代多次。

5.昆蟲細胞在適應(yīng)過程中可能會膨脹。膨脹2-3微米是正?，F(xiàn)象，5微米以上是細胞應(yīng)激培養(yǎng)的提醒，應(yīng)該用一批新的細胞重新開始 適應(yīng)。 在100% ESF 921中傳代幾次后，活細胞計數(shù)應(yīng)符合上表，存活率>90%。

低溫冷藏 

1.凍存培養(yǎng)基為無菌過濾的90% ESF 921+10%DMSO。可添加0.15 M的海藻糖，在4°C進行存儲和使用。 

2.準(zhǔn)備所需數(shù)量的細胞，在對數(shù)生長期，活力>90%。

3.確定活細胞的密度，并計算所需的冷凍介質(zhì)的體積，保證最終的細胞密度在25-50x106細胞/mL。

4.1000 rpm離心5分鐘，收獲細胞，將細胞重懸于預(yù)定體積的4°C冷凍培養(yǎng)基中。

5.按照1mL等分懸浮液放入冷凍瓶中。

6.按照標(biāo)準(zhǔn)程序(每分鐘降低1°C)在自動或手動控制速率的冷凍設(shè)備中實現(xiàn)低溫保存。

7.將冷凍細胞轉(zhuǎn)移到液氮中，建議在-200°C至-125°C的氣相儲存。