Mirus TransIT-VirusGEN系列轉(zhuǎn)染試劑
- 公司名稱 北京西美杰科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 Mirus
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 代理商
- 更新時間 2022/4/15 17:13:54
- 訪問次數(shù) 697
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病毒載體技術(shù)的進(jìn)步提高了基因和細(xì)胞治療的安全性和有效性,全球已有多種基因和細(xì)胞治療藥物被監(jiān)管機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)上市。目前大多數(shù)基因/細(xì)胞治療方法都是利用病毒載體來實(shí)現(xiàn)的,其中常用的兩種病毒載體——腺相關(guān)病毒(AAV)載體常被用于基因治療,而慢病毒(LV)載體則常被用于基因修飾的細(xì)胞治療。病毒載體通常是將2-4個質(zhì)粒共轉(zhuǎn)入HEK293細(xì)胞生產(chǎn)出的,而轉(zhuǎn)染試劑是病毒載體生產(chǎn)的關(guān)鍵要素之一,對轉(zhuǎn)染效率和功能效價有顯著影響。第一代非病毒轉(zhuǎn)染方法依靠簡單的線性聚合物,如聚乙烯亞胺(PEI)或脂質(zhì)體將DNA轉(zhuǎn)入到細(xì)胞內(nèi),但其性能并不能*病毒載體的大規(guī)模生產(chǎn)需求。雖然人工合成轉(zhuǎn)染試劑在過去30年里取得了巨大的進(jìn)步,但仍然難以逾越大自然在數(shù)十億年進(jìn)化出的依靠病毒傳遞基因的效率。因此,優(yōu)化非病毒轉(zhuǎn)染性能的最佳方法是盡可能模仿出病毒轉(zhuǎn)運(yùn)DNA的自然機(jī)制的試劑。
TransIT-VirusGEN系列轉(zhuǎn)染試劑
西美杰代理的Mirus轉(zhuǎn)染試劑就是利用自然基因傳遞機(jī)制作為其化合物庫的設(shè)計靈感,從中篩選出適合病毒生產(chǎn)的混合配方,將轉(zhuǎn)染試劑與核酸的靜電相互作用、細(xì)胞吸附與內(nèi)吞、胞內(nèi)釋放、基因表達(dá)效率和降低細(xì)胞毒性等幾乎所有影響轉(zhuǎn)染成功率的因素全部考慮在內(nèi)。通過不懈的努力,Mirus開發(fā)出了一種全新的仿生轉(zhuǎn)染技術(shù)——TransIT-VirusGEN系列轉(zhuǎn)染試劑,它不僅僅是基于PEI或脂質(zhì)體,而是采用多組分脂質(zhì)聚合物納米復(fù)合物(LPNC),能夠高效地結(jié)合和包裹DNA,將其帶入懸浮或貼壁的HEK293細(xì)胞中,然后將其從細(xì)胞核內(nèi)釋放,以便同時滿足2-4個不同的質(zhì)粒的表達(dá),這種全新的轉(zhuǎn)染試劑比單獨(dú)使用PEI及其衍生聚合物或脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染效率和完整病毒生產(chǎn)效率都有顯著提高。同時,Mirus還研發(fā)出了一種*合成的(無動物源)轉(zhuǎn)染增強(qiáng)劑(Enhancer),與TransIT-VirusGEN轉(zhuǎn)染試劑搭配使用時,可以進(jìn)一步提高病毒滴度。另外,為了滿足病毒載體從研發(fā)到大規(guī)模生產(chǎn)不同階段的需求,Mirus分別推出了R&D、SELECT和GMP三種級別的TransIT-VirusGEN轉(zhuǎn)染系列產(chǎn)品,以適應(yīng)不同階段病毒載體的生產(chǎn)規(guī)模、效率以及法規(guī)要求。
實(shí)驗(yàn)表明,Mirus基于LPNC的轉(zhuǎn)染試劑可以在不同的細(xì)胞培養(yǎng)平臺(貼壁和懸?。?/span>、生物反應(yīng)器和培養(yǎng)基類型中提高病毒產(chǎn)量和功能性病毒滴度。與業(yè)內(nèi)其他金標(biāo)準(zhǔn)相比,在不使用增強(qiáng)劑的情況下,病毒滴度至少可提高2-4倍。而在加入增強(qiáng)劑之后,在合適的培養(yǎng)條件下,病毒產(chǎn)量甚至能夠提高10倍以上!(結(jié)果見下圖1-5)
圖1. 基于脂質(zhì)聚合物納米復(fù)合物(LPNC)和聚乙烯亞胺(PEI)配方的轉(zhuǎn)染試劑用于腺相關(guān)病毒(AAV)和慢病毒(LV)載體生產(chǎn)的性能對比。分別用基于LNPC的TransIT-VirusGEN試劑(不含增強(qiáng)劑與含增強(qiáng)劑)、25kda PEI和基于PEI技術(shù)的競爭品牌A3轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)生AAV(左)和LV(右)。以LPNC為基礎(chǔ)的TransIT-VirusGEN轉(zhuǎn)染試劑比以PEI為基礎(chǔ)的轉(zhuǎn)染試劑的病毒顆粒表達(dá)量高3-5倍。當(dāng)TransIT-VirusGEN和增強(qiáng)劑同時使用時,比單獨(dú)使用TransIT-VirusGEN大約提升了一倍。轉(zhuǎn)染試劑 : DNA的比值為體積 : 質(zhì)量。
圖2. TransIT-VirusGEN轉(zhuǎn)染試劑在不同細(xì)胞培養(yǎng)基中的表現(xiàn)。使用Thermo Fisher Scientific公司的病毒生產(chǎn)細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染,該細(xì)胞適應(yīng)四種不同的培養(yǎng)基配方,分別來自Thermo Fisher公司的LV-MAX培養(yǎng)基、Expi293表達(dá)培養(yǎng)基、FreeStyle F17表達(dá)培養(yǎng)基和來自Irvine Scientific公司的BalanCD HEK293培養(yǎng)基。后一種培養(yǎng)基的AAV總效價較高,但在所有使用的培養(yǎng)基中,無論是否添加增強(qiáng)劑,TransIT-VirusGEN轉(zhuǎn)染試劑均表現(xiàn)優(yōu)異。DNA與轉(zhuǎn)染試劑配比為2μg DNA :3μl轉(zhuǎn)染試劑,轉(zhuǎn)染細(xì)胞密度為2.0×106個/ml。生產(chǎn)LV也獲得了類似的結(jié)果(數(shù)據(jù)未顯示)。
圖3. 分別在四種不同的轉(zhuǎn)染條件和兩個不同的收獲時間,測定TransIT-VirusGEN轉(zhuǎn)染試劑和PEI為基礎(chǔ)的轉(zhuǎn)染試劑A3的物理滴度和功能滴度。利用Expi293F細(xì)胞生產(chǎn)AAV2-GFP。轉(zhuǎn)染48小時和72小時后收獲的病毒分別測定功能滴度TU/mL(左)和物理滴度GC/mL(右)。結(jié)果顯示用TransIT-VirusGEN轉(zhuǎn)染試劑和增強(qiáng)劑轉(zhuǎn)染收獲的病毒效價最高。此外,TransIT-VirusGEN轉(zhuǎn)染試劑比PEI為基礎(chǔ)的轉(zhuǎn)染試劑的表達(dá)更快。這些結(jié)果表明,對于病毒滴度的評估,功能滴度可能是一個更可靠的指標(biāo)。因此,建議測試幾個不同的收獲時間點(diǎn)來確定最佳方案。
圖4. 每種培養(yǎng)體系都應(yīng)優(yōu)化轉(zhuǎn)染時的細(xì)胞融合度和接種密度。用DMSO+10%胎牛血清培養(yǎng)貼壁的HEK293t/17細(xì)胞生產(chǎn)慢病毒(1μg DNA/mL)。試劑盒包括TransIT-VirusGEN轉(zhuǎn)染試劑、VirusGEN LV復(fù)合物形成溶液和VirusGEN LV增強(qiáng)劑。
圖5. 在Expi293表達(dá)培養(yǎng)基中培養(yǎng)Expi293F細(xì)胞,使用VirusGEN AAV轉(zhuǎn)染試劑盒,內(nèi)含TransIT-VirusGEN轉(zhuǎn)染試劑、VirusGEN AAV復(fù)合物形成溶液和VirusGEN AAV增強(qiáng)劑,在懸浮細(xì)胞培養(yǎng)中生產(chǎn)AAV。分別用2:1(左)和3:1(右)兩種比例來確定理想的轉(zhuǎn)染試劑和DNA配比(體積:質(zhì)量)。每種轉(zhuǎn)染體系都應(yīng)對轉(zhuǎn)染試劑: DNA配比及每毫升細(xì)胞所需的總DNA量進(jìn)行優(yōu)化。
TransIT-VirusGEN系列轉(zhuǎn)染產(chǎn)品信息
TransIT-VirusGEN系列轉(zhuǎn)染試劑
美國Mirus公司成立于1995年,是世界上很早開發(fā)高效、低毒轉(zhuǎn)染試劑的公司之一,同時也是目前該類試劑主要的供應(yīng)商之一。Mirus許多杰出成果獲得廣大用戶的好評。
北京西美杰科技有限公司是Mirus中國區(qū)代理,始終秉承著專業(yè)、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度為客戶提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。如果您對上述產(chǎn)品感興趣,歡迎聯(lián)系北京西美杰解更多產(chǎn)品信息或申請試用。北京西美杰是Mirus代理,Mirus中國代理,Mirus北京代理,Mirus總代理,Mirus上海代理,,Mirus西北代理,Mirus西南代理,Mirus東北代理,Mirus華北代理,Mirus華南代理,Mirus華中代理,負(fù)責(zé)Mirus在中國的相關(guān)業(yè)務(wù)。
引用文獻(xiàn):
Addressing Critical Issues in Cell & Gene Therapy, Snow, J.