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1.產(chǎn)品介紹

    CNBr Focurose 4FF是經(jīng)過(guò)溴化氰活化后含有氰酸酯基團(tuán)的快流速純化介質(zhì)，適用于偶聯(lián)蛋白質(zhì)、多肽、核酸等含有氨基的生物分子。在生物醫(yī)藥純化工藝中經(jīng)過(guò)反復(fù)的驗(yàn)證，得到了廣泛的應(yīng)用。

特點(diǎn)如下：

a.應(yīng)用廣泛，可適用于偶聯(lián)含氨基的生物類(lèi)大分子。

b.多點(diǎn)偶聯(lián)，簡(jiǎn)單、靈活、快速、有效，能高效的維持生物分子的生物學(xué)活性及穩(wěn)定性。

c.流速快、產(chǎn)率高、易于放大。

表1：介質(zhì)性能參數(shù)

2.偶聯(lián)條件

a.（A液）清洗

取適量的沉降膠（0.83g清洗完成后約為1.0ml），用5倍體積的A液將介質(zhì)重懸，5min后將溶液抽干。重復(fù)此步驟5次。

備注：此步驟用于激活介質(zhì)，要保證A液的清洗體積要充足、清洗時(shí)間固定在0.5h左右（時(shí)間太久介質(zhì)上面的基團(tuán)會(huì)水解）。

b.配基溶液的制備

將要偶聯(lián)的生物分子用B液溶解或者將生物分子置換到B液中（生物分子濃度為1-10mg/ml,建議為5mg/ml）。

備注：確保偶聯(lián)時(shí)的pH和鹽濃度與B液一致。

c.偶聯(lián)

將清洗完的介質(zhì)和準(zhǔn)備好的樣品按等比例（體積比）混合，室溫條件下溫和混勻3-4h。確定偶聯(lián)成功（通過(guò)測(cè)定偶聯(lián)前后生物分子含量確定偶聯(lián)效率）后，將溶液抽干。

備注：偶聯(lián)建議在室溫條件下偶聯(lián)3-4h。對(duì)于不穩(wěn)定的配基，建議4-8℃偶聯(lián)過(guò)夜。

d.（C液）清洗

用5倍體積的C液將偶聯(lián)后的介質(zhì)重懸，再將溶液抽干。再重復(fù)此步驟3次。

備注：此步驟用于清洗介質(zhì)中殘留的生物分子，清洗要*。

e.封閉

用5倍體積的C液進(jìn)行重懸，室溫條件下溫和混勻3-4小時(shí)后，將溶液抽干。

備注：此步驟用于封閉介質(zhì)上面的基團(tuán)，室溫條件下溫和混勻3-4小時(shí)即可。

f.（D液和E液）清洗

用5倍體積的D液將封閉后的介質(zhì)重懸，5min后將溶液抽干；再用5倍體積的E液將介質(zhì)重懸，5min后將溶液抽干。重復(fù)此步驟3次。

備注：此步驟用于酸堿清洗掉偶聯(lián)不夠緊密的生物分子。

g.保存

用5倍體積的純化水將介質(zhì)重懸后抽干，再用5倍體積的20%乙醇將介質(zhì)重懸后抽干，最后用20%乙醇浸泡保存。

備注：此步驟用于保存介質(zhì)，避免微生物生長(zhǎng)。

h.溶液配制

A液：0.001MHCl、0.5M NaCl，調(diào)節(jié)pH 3.0，4-8℃保存（A液使用前要進(jìn)行預(yù)冷處理）。

B液：0.2M NaHCO3、0.5 M NaCl，調(diào)節(jié)pH 8.3（如果要偶聯(lián)的生物分子為IgG時(shí)，pH=8.5-9.0），室溫保存。

C液：0.1M Tris-HCl，調(diào)節(jié)pH 8.3，室溫保存。

D液：0.05M Tris-HCl、0.5M NaCl，調(diào)節(jié)pH 8.5，室溫保存。

E液：O.05M 甘氨酸、0.5MNaCl，調(diào)節(jié)pH 3.5，室溫保存。

F液：1.0M NaCl，室溫保存。

3.清洗

    清洗后可以去除一些強(qiáng)結(jié)合性物質(zhì)（例如一些強(qiáng)結(jié)合的蛋白、變性蛋白、脂類(lèi)等），從而達(dá)到恢復(fù)介質(zhì)的優(yōu)良性能（例如載量、流動(dòng)性、柱效等）。

    建議每使用5次后進(jìn)行一次清洗，具體清洗頻率需根據(jù)純化的初始樣品的潔凈度進(jìn)行調(diào)整。

⑴常規(guī)清洗

a.用5-10倍柱體積的純化水沖洗。

b.用5-10倍柱體積的D液沖洗。

c.用5-10倍柱體積的E液沖洗。

d.用5-10倍柱體積的F液沖洗。

e.用5-10倍柱體積的純化水沖洗。

f.用5-10倍柱體積的20%乙醇沖洗后保存。

⑵劇烈清洗

a.用2-5倍柱體積0.2%非離子型去污劑沖洗后，立即用5-10倍柱體積純化水沖洗。

b.用2-5倍柱體積6M鹽酸胍沖洗后，立即用5-10倍柱體積純化水沖洗。

c.用5-10倍柱體積的20%乙醇沖洗后保存。

備注：劇烈清洗條件是否適用主要取決于偶聯(lián)的生物分子的穩(wěn)定性，采用此條件清洗前，建議先做一個(gè)小規(guī)模的預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證生物分子的穩(wěn)定性。

4.應(yīng)用案例

案例一

案例二

5.常見(jiàn)問(wèn)題

表2：常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案

6.訂購(gòu)信息

表3：訂購(gòu)信息表

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