細(xì)胞名稱  SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細(xì)胞；COS-7培養(yǎng)
形態(tài)特性 成纖維細(xì)胞樣　

品牌 貼壁生長

特征特性 該細(xì)胞株源自CV-1細(xì)胞株，經(jīng)轉(zhuǎn)染起始點(diǎn)缺失的SV40病毒突變體得到；編碼表達(dá)野生型T抗原，所以該細(xì)胞適合作為需要SV40 T抗原表達(dá)的載體的轉(zhuǎn)染宿主。該細(xì)胞表達(dá)T抗原，允許SV40病毒的溶解性生長，支持40℃時(shí)溫度敏感性A209病毒的復(fù)制，支持起始區(qū)域缺陷的SV40突變體的復(fù)制。因含有SV40病毒的DNA序列，該細(xì)胞需要在2級(jí)生物安全柜中操作。

培養(yǎng)條件 DMEM-H：

Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H
SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細(xì)胞；COS-7培養(yǎng)貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強(qiáng)度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進(jìn)行消化，(根據(jù)經(jīng)驗(yàn))，晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮，然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長至60%～70%融合時(shí)，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計(jì)算貼壁率。 
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長曲線
Anti-EGFR /Gold 金標(biāo)記表皮生長因子受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.5ml

Anti-MYL3/Myosin light chain 3/Biotin 生物素標(biāo)記 肌球蛋白輕鏈3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh C2orf57 2號(hào)染色體開放閱讀框57抗體 規(guī)格 0.2ml

CCR-1(CC chemokine receptor 1) 細(xì)胞表面趨化因子受體1抗原 0.5mg

HDL 英文名稱： 高密度脂蛋白抗體 0.1ml

Rhesus antibody Rh SAMD9 SAMD9蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml

Anti-MYL3/Myosin light chain 3/Biotin 生物素標(biāo)記 肌球蛋白輕鏈3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Inhibin Alpha 抑制素α抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Anti-AEV(Avian Encephalomyelitis virus) 禽腦脊髓炎病毒AEV抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-Cdc25B (Ser149) 磷酸化細(xì)胞分裂周期蛋白25B抗體 規(guī)格 0.1ml

溴化已錠染色液 -紅色 1ml Sigma原料,自產(chǎn)

Wnt1 英文名稱： 信號(hào)通路Wnt1抗體 0.1ml

Dynorphin A 英文名稱： 腦啡肽A抗體 0.2ml

Anti-AEV(Avian Encephalomyelitis virus) 禽腦脊髓炎病毒AEV抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rabbit Anti-human sIgA/Bio 生物素標(biāo)記的兔抗人分泌型IgA 0.1ml

FNBP1L 英文名稱： FNBP1L蛋白抗體 0.2ml

DEK癌基因結(jié)合蛋白 anti-DEK oncogene 0.1ml

Anti-PAX9/FITC 熒光素標(biāo)記配對(duì)盒基因9抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-Troponin I(Ser23/24) 磷酸化鈣調(diào)節(jié)蛋白-1抗體 規(guī)格 0.1ml

Goat Anti-Guinea IgG/FITC 熒光素標(biāo)記羊抗豚鼠IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.3ml
B7-2/sCD86 ELISA Kit 大鼠可溶性CD86Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-VEGFR1 血管內(nèi)皮生長因子受體1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh gamma Synuclein 核突觸蛋白-γ抗體 規(guī)格 0.1ml

EG-VEGF(Human Endocrine gland vascular endothelial growth factor) ELISA Kit 人內(nèi)分泌腺來源的血管內(nèi)皮生長因子 96T

NOX2 英文名稱： NADPH氧化酶2抗體 0.1ml

phospho-ATG3 (Tyr18) 英文名稱： 磷酸化自噬相關(guān)蛋白3抗體 0.1ml

Anti-VEGFR1 血管內(nèi)皮生長因子受體1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。