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人APP-PS1雙基因轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞株;7WPS1價格
- 公司名稱 上海研生實業(yè)有限公司
- 品牌 ATCC
- 型號
- 產(chǎn)地 進(jìn)口/國產(chǎn)
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時間 2018/5/7 15:46:58
- 訪問次數(shù) 354
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人APP-PS1雙基因轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞株;7WPS1價格懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
細(xì)胞名稱 人APP-PS1雙基因轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞株;7WPS1價格
形態(tài)特性 多角
品牌 貼壁生長
特征特性 利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將野生型PS1基因轉(zhuǎn)染穩(wěn)定表達(dá)APP基因的CHO細(xì)胞,該細(xì)胞既表達(dá)PS-1,同時也分泌Aβ。
培養(yǎng)條件 DMEM-H:
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS;250ug/ml G418+2.5ug/ml puromycin
傳代方法 1:
3傳代;2~3天1次。
傳代情況 C2
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原?
貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長曲線
Anti-phospho-IKK beta (Tyr199) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化核因子κB激酶beta抑制劑抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-Profilin 2/FITC 熒光素標(biāo)記前纖維蛋白2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh APOL3 載脂蛋白L3抗體 規(guī)格 0.2ml
Rabbit Anti-pig IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗豬IgG 0.1ml
GST tag 英文名稱: GST標(biāo)簽蛋白抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Rabbit anti-MG IgG/Cy7 Cy7標(biāo)記的兔抗長爪沙鼠IgG 規(guī)格 0.1ml
Anti-Profilin 2/FITC 熒光素標(biāo)記前纖維蛋白2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Lp-PL-A2 ELISA Kit 大鼠脂蛋白磷脂酶A2Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Zyxin/ESP 2 斑聯(lián)蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh FSH receptor 促卵泡刺激素受體抗體 規(guī)格 0.1ml
IGFBP-4(Human insulin-like growth factors binding protein 4) ELISA Kit 人胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白4 96T
NSE 英文名稱: 神經(jīng)元特異性烯醇化酶/γ 烯醇化酶抗體 0.1ml
phospho-APC6 (Thr580) 英文名稱: 磷酸化細(xì)胞分裂周期蛋白16抗體 0.1ml
Anti-Zyxin/ESP 2 斑聯(lián)蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rabbit anti-mouse Kappa light chain/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈 0.1ml
FBX09 英文名稱: F-box蛋白9抗體 0.2ml
細(xì)胞球蛋白抗體 Anti-Cygb 0.1ml
Anti-PALB2/FITC 熒光素標(biāo)記癌易感基因相關(guān)蛋白2IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-Tyrosine Hydroxylase (Ser40) 磷酸化酪氨酸羥化酶抗體 規(guī)格 0.1ml
BSA/FITC 熒光素標(biāo)記血清白蛋白Multi-class antibodies規(guī)格: 0.3ml
Anti-HSP-105/FITC 熒光素標(biāo)記熱休克蛋白HSP105抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-phospho-PKC delta (Thr505)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化蛋白激酶C亞性D型抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh ASB2 含錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號抑制物盒蛋白家族2抗體 規(guī)格 0.2ml
Donkey Anti-Goat IgG/RBITC 羅丹明標(biāo)記的驢抗羊IgG 0.1ml
GLDC 英文名稱: 甘酸脫羧酶P蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-mouse IgG 兔抗小鼠IgG 規(guī)格 1mg
Anti-phospho-PKC delta (Thr505)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化蛋白激酶C亞性D型抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
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