Luc-100 穩(wěn)定型螢火蟲熒光素酶報告基因檢測試劑盒
| 參考價 | ￥ 2180 |
| 訂貨量 | ≥1件 |
- 公司名稱 上海炎熙生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 Luc-100
- 產(chǎn)地 上海
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2024/9/12 11:43:53
- 訪問次數(shù) 1164
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100毫升 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | Luc-100 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),制藥 |
| 主要用途 | 用于基因調(diào)控和細胞信號傳導(dǎo)研究 |
穩(wěn)定型螢火蟲熒光素酶報告基因檢測試劑盒
Steady Firefly Luciferase reporter Assay Kit
貨號 | 規(guī)格 |
Luc-10 | 10毫升 |
Luc-100 | 100毫升 |
產(chǎn)品原理：
螢火蟲熒光素酶報告基因檢測試劑盒(Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit)，是一種以熒光素(luciferin，也稱螢光素)為底物， 檢測熒光素酶(firefly luciferase， 也稱螢光素酶)活性的試劑盒。螢火蟲熒光素酶是一種分子量約為61 KD的蛋白，在ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下， 可以催 化luciferin氧化成oxyluciferin。在luciferin氧化的過程中，會發(fā)出生物發(fā)光(bioluminescence)。生物發(fā)光可以通過化學(xué)發(fā)光儀(luminometer)或液閃測定儀進行測定。
通過熒光素和熒光素酶這一生物發(fā)光體系，可以非常靈敏、高效地檢測基因的表達。通常把所研究基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件或 5’啟動子區(qū)克隆在luciferase基因的上游，或把3’-UTR區(qū)克隆在luciferase基因的下游， 構(gòu)建成報告基因(reporter gene)質(zhì)粒，然后轉(zhuǎn)染細胞，用適當方法處理細胞后，測定熒光素酶的活性。通過熒光素酶活性的高低，來判斷處理方法對目的基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控的影響。
穩(wěn)定型螢火蟲熒光素酶報告基因檢測試劑盒通過成分優(yōu)化，可以保持信號值長時間穩(wěn)定，非常適合高通量篩選的要求。
保存條件：
-20oC避光保存6個月有效，-80oC避光保存，一年有效。盡量避免反復(fù)凍融。
使用方法：
室溫下融解，同時將培養(yǎng)好的細胞從培養(yǎng)箱中取出，在二者都達到室溫且溫度*時，開始下一步實驗；
向細胞加入與培養(yǎng)基等體積的穩(wěn)定型熒光素酶檢測試劑，并在室溫下平緩振搖孵育至少5分鐘，以使細胞充分裂解，此過程可以用錫箔紙覆蓋避光。不論細胞培養(yǎng)在何種器皿中，加入與培養(yǎng)基等體積的熒光素酶檢測試劑即可；
開啟化學(xué)發(fā)光儀或具有檢測化學(xué)發(fā)光功能的多功能酶標儀，設(shè)置適當參數(shù)；
進行讀數(shù)，可以直接在96孔板或384孔板中讀數(shù)，也可以吸出100-200微升到發(fā)光管中進行讀數(shù)。本產(chǎn)品信號值非常穩(wěn)定，半衰期大于5小時，可達到高通量篩選的要求。
螢光素酶報告基因的主要優(yōu)點：
報告基因 | 優(yōu)點 | 缺點 |
螢光素酶 | *的靈敏度 | 需要底物 |
高信號值 | ||
無內(nèi)源活性 | ||
靈敏度好 | 細菌，血清等內(nèi)源活性高 | |
需要底物 | ||
| 靈敏度好 | 90% 的 E.coli, 人／動物細胞中有內(nèi)源活性 |
植物中內(nèi)源活性低 | 酶的擴散可引起 “過度報告” | |
需要底物 | ||
| 分泌性報告基因不需裂解 | 在癌和其它細胞類型中有高的內(nèi)源活性 |
需要底物 | ||
| 真核細胞沒有背景表達 | 放射性的 |
易于使用 | 靈敏度底 | |
設(shè)備現(xiàn)成液閃儀層析 |
| |
| 顯微鏡亞細胞定位 | 背景可能高 |
不需底物 | 折疊 “情形” 可導(dǎo)致信號差別 |
的優(yōu)點
靈敏度高，zui低可檢測10‐20摩爾熒光素酶分子，比Western Blot靈敏度高1000倍以上；
檢測范圍廣，在10-16 M(10 pg/L)至10-8 M(1 mg/L)范圍內(nèi),光強度與熒光素酶濃度成正比；
發(fā)光檢測，檢測方便，內(nèi)源性低，哺乳動物無內(nèi)源性表達，熒光素酶檢測不受細胞內(nèi)其他物質(zhì)影響；
試劑盒成分經(jīng)過優(yōu)化處理，可以使信號值保持長時間穩(wěn)定，半衰期大于5小時，非常適合高通量篩選的要求。
主要應(yīng)用領(lǐng)域
1、啟動子核心區(qū)域檢測，增強子/抑制子等調(diào)控子核心元件檢測；
2、啟動子/增強子與轉(zhuǎn)錄因子的相互作用，啟動子區(qū)可能的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點檢測；
3、細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑研究；
4、病毒/細胞相互作用；
5、藥物等化學(xué)誘導(dǎo)因素或射線等物理誘導(dǎo)因素對啟動子活性的調(diào)節(jié)（抑制或增強）。
注意事項：
常見培養(yǎng)基如RPMI1640、DMEM、F-12、MEM等，以及酚紅、血清、PBS和其他緩沖液等，都不影響熒光素酶檢測試劑的使用。穩(wěn)定型熒光素酶檢測試劑經(jīng)過成分優(yōu)化處理，可使信號值保持穩(wěn)定，半衰期大于5小時，非常適合高通量篩選的要求。
由于溫度對酶反應(yīng)有影響，所以樣品和試劑均需達到室溫后再進行測定。
為保證熒光素酶檢測試劑的穩(wěn)定，可以采取適當分裝后避光保存的方法，以避免反復(fù)凍融和長時間暴露于室溫；經(jīng)測試，反復(fù)凍融三次，對測定結(jié)果無明顯影響。
細胞如果在96孔或384孔板中直接讀數(shù)，需要使用白色或黑色不透明的培養(yǎng)板，以免發(fā)生孔與孔之間的信號干擾。
為避免由于質(zhì)粒轉(zhuǎn)細胞時效率的差異而帶來的誤差，可以同時轉(zhuǎn)入海腎熒光素酶(Renilla luciferase)的報告基因質(zhì)粒或β-半乳糖苷酶(β-galactosidase, β-gal)的報告基因質(zhì)粒等作為內(nèi)參。
本產(chǎn)品*于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
常見問題：
Luminometer和熒光分光光度計有何不同？ 熒光分光光度計檢測的樣品本身不能發(fā)光，樣品需要由特定波長的激發(fā)光激發(fā)，然后才能產(chǎn)生熒光并被熒光分光光度計檢 測。Luminometer檢測的樣品本身可以發(fā)光，不需要激發(fā)光進行激發(fā)。也就是說luminometer是檢測化學(xué)發(fā)光(螢光)的儀器。有些型號的熒光分光光度計也具有l(wèi)uminometer的功能，即也可以檢測化學(xué)發(fā)光。您所使用的熒光分光光度計能否用于化學(xué)發(fā)光的測定請仔細閱讀該儀器的說明書，或咨詢儀器供應(yīng)商。
可以進行ATP化學(xué)發(fā)光檢測的儀器是否就可以用于本試劑盒的檢測？ 是。ATP化學(xué)發(fā)光的檢測原理和本試劑盒的原理相同，可以用相同的儀器測定。
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