波多野结衣中文无码,一区二区三区中文字幕人妻,日本福利一区二区三区四区,久久er99精品国产一区

蛋白磷酸化檢測方法優(yōu)缺點分述2025/03/11

蛋白激酶將磷酸基團從ATP轉移到蛋白多肽底物上的絲氨酸、蘇氨酸或酪氨酸殘基，直接影響目標的活性和功能。放射性研究表明，真核細胞中大約30%的蛋白經過磷酸化修飾。這一關鍵的翻譯后修飾調控了廣泛的細胞活性，包括細胞周期、分化、代謝和神經元通訊。此外，異常的磷酸化事件與許多疾病狀態(tài)相關。在評估磷酸化時，選擇的方法可能會有所不同，這取決于多個因素，包括提出的具體問題以及特殊儀器或試劑的可用性。如何檢測蛋白磷酸化，本文簡要介紹了幾種常用方法，并提出了每種方法的優(yōu)點和缺點。激酶活性分析蛋白激酶通常是多個信號

免疫學工具酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、免疫組化、WB講解2025/03/03

酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）：用到了免疫學原理和化學反應顯色，待測的樣品多是血清、血漿、尿液、細胞或組織培養(yǎng)上清液，因而沒有用到組織包埋、切片等技術，這是與免疫組化的主要區(qū)別，操作上開始需要將抗原或抗體結合到固相載體表面，從而使后來形成的抗原-抗體-酶-底物復合物粘附在載體上，這就是“吸附"的含義。免疫組化和elisa所用到的原理大致相同，只是因為所檢測的樣品不同，從而在操作方法上有所不同。Elisa多用于定量分析，其靈敏度非常高。免疫組化：是融合了免疫學原理（抗原抗體特異性結合）和組織學技術

qPCR反應中的Ct值是什么？2025/02/25

閾值循環(huán)數(shù)Thresholdcycle(Ct)也寫作Cq值，熒光信號大于熒光閾值時PCR循環(huán)數(shù)。儀器軟件通常將第3-15個循環(huán)的熒光值設為基線（baseline），是由于測量的偶然誤差引起的。閾值（threshold）一般是基線的標準偏差的10倍。在實際操作中也可以手動調節(jié)。高于閾值的熒光信號被認為是真實的信號，用于定義Ct值。Ct會受到閾值的影響，每次試驗由于樣品和儀器的不同會導致基線不同，進而影響閾值和Ct值。模板的Ct值與該模板的起始拷貝數(shù)的對數(shù)存在一定線性關系,起始模板量濃度越高，Ct值

酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）試驗非特異性問題分析2025/02/18

酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）是一種使用酶標儀進行測定的免疫測定法，用于檢測和定量生物分子，其它免疫診斷方法一樣酶免試劑在它的研究、生產及使用中常常會碰到非特異性問題。1、試劑盒特異性因素1、1固相載體的選擇。ELISA中常用的固相載體有微量滴定板、小珠和小試管三種，以微量滴定板最為常見。它具有良好的吸附性能，孔底透明度高，空白值低，各板之間、同一板各孔之間性能相近。聚苯y(tǒng)i烯ELISA板由于原料的不同和制作工藝的差別，各產品的質量差異很大。因此，在選擇試劑盒同時要對其使用的微孔板型號進行認證，

ELISA酶聯(lián)接免疫吸附劑測定實驗標準品溶解稀釋流程2025/02/14

ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)的簡稱，是一種檢測方法，標準品是相對于具體的物質有具體的標準品。ELISA標準曲線是結果計算的尺子，標準品是ELISA實驗成功與否的關鍵點。ELISA實驗標準品溶解稀釋流程：1、粉末標準品短暫離心，讓因運輸沾到管蓋、管壁的標準品沉到管底。2、根據瓶標簽加入一定體積的蒸餾水，加水后輕柔渦旋震蕩，室溫靜置溶解10-30min，讓粉末全溶解。注意：加水后暫不用移液槍吹吸，避免蛋白未溶解，槍頭帶出部分蛋白

標準溶液的配制方式及過程2025/02/10

標準溶液指的是具有準確已知濃度的試劑溶液，在滴定分析中常用滴定劑。在其他的分析方法中用標準溶液繪制工作曲線或作計算標準。標準溶液的濃度標定：標準溶液的濃度標定因配置溶液不同而有所不同。標準溶液的配制方法有兩種：1、直接配制法在分析天平上準確稱取一定量已干燥的基準物溶于水后，轉入已校正的容量瓶中用水稀釋至刻度，搖勻，即可算出其準確濃度。2、標定法很多物質不符合基準物生物條件，不能直接配制標準溶液。一般先將這些物質配成近似所需濃度溶液，再用基準物測定其準確濃度。標定的方法有直接標定和間接標定兩種，間

PCR反應DNA 復制過程解讀2025/01/21

PCR全稱多聚酶鏈式反應（polymerasechainreaction），是一種非常強大的技術，可以通過一種非常簡單但是高效的方法來復制DNA，它可看作是生物體外的特殊DNA復制，PCR的最大特點是能將微量的DNA大幅增加。復制DNA必要性：DNA復制是很多研究的基礎，例如，當我們對RNA進行測序時，必須先將RNA轉化為DNA，并進行大量復制。在對于某個人進行基因組測序時，我們不能對于某個細胞或者單個分子進行測序。測序的基礎要求擁有大量的相同的DNA分子拷貝，因此，DNA復制是做生物研究中的基

微生物實驗室培養(yǎng)基應用技巧匯集2025/01/14

培養(yǎng)基是液體、半固體或固體形式的，含天然或合成成分，用于保證微生物繁殖或保持其活力的物質。培養(yǎng)基的制備和使用是微生物實驗室檢測工作的重要環(huán)節(jié)，培養(yǎng)基自身質量的優(yōu)劣、保存是否得當、配制使用是否正確等都直接影響到檢測結果的準確性。一、培養(yǎng)基的購置與驗收1.購置從培養(yǎng)基自身的質量來看，不同生產廠家的產品，甚至同一廠家不同批號的產品都會存在差異。依據ISO/IEC17025《檢測和校準實驗室能力的通用要求》，對培養(yǎng)基的供應企業(yè)進行評價后選擇合格的供應商，這是培養(yǎng)基購買過程中重要的步驟。應選擇產品市場信譽

酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）實驗操作重點之一加樣解讀2025/01/07

酶聯(lián)免疫吸附測定（Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay，ELISA）是免疫學和分子生物學中廣泛使用的實驗室技術。免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特異性識別和結合原理，對待測抗體或者抗原進行分析測定的方法，酶聯(lián)免疫吸附分析（下稱ELISA）是免疫分析的一種，分三個部分組成：免疫識別，信號輸出和數(shù)據處理。ELISA實驗測定操作簡單，一般涉及到樣本的收集保存、試劑準備、加樣、溫育、洗板、顯色、結果判斷和結果報告及解釋等方面，其中任一步驟的不當都會影響

ELISA酶聯(lián)吸附試驗標本引起結果問題分析2025/01/03

ELISA（enzymelinkedimmunosorbentassay）即酶聯(lián)吸附試驗，是一種常用的固相酶免疫測定方法。血清是常用的ELISA試劑盒試驗常用的標本，血漿一般可視為與血清同等的標本，標本引起的假陽性和假陰性結果主要是干擾性物質所致，分為內源性物質和外源性物質兩種。1、內源性物質有人認為大約40%的人血清標本中含有非特異性干擾物質，可以不同程度影響檢測結果。常見的干擾物質有：類風濕因子、補體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導的抗鼠Ig(s)抗體、交叉反應物質和其它物質等。（

免疫熒光技術實驗步驟與優(yōu)缺點2024/12/24

免疫熒光技術（Immunofluorescence，IF）又稱熒光抗體技術，是標記免疫技術中發(fā)展最早的一種。它是根據抗原抗體反應的原理，先將已知的抗原或抗體標記上熒光基團，再用這種熒光抗體（或抗原）作為探針檢查細胞或組織內的相應抗原（或抗體）。利用熒光顯微鏡可以看見熒光所在的細胞或組織，從而確定抗原或抗體的性質和定位。原理：免疫熒光技術是根據抗原抗體反應的原理，先將已知的抗原或抗體標記上熒光素，制成熒光抗體，再用這種熒光抗體（或抗原）作為探針檢測組織或細胞內的相應抗原（或抗體）。在組織或細胞內形

ELISA檢測試驗雙抗體夾心法和競爭法比較2024/12/17

酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）指將可溶性的抗原或抗體結合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體結合專一性進行免疫反應的定性和定量檢測方法。它是應用最多的一種免疫酶技術。ELISA試劑盒（ELISAKits）已成為藥物和植物病理學研究中的常用診斷工具，是檢測組織提取液、血清和細胞培養(yǎng)液中目標抗體/抗原的理想工具，也是重要的質量控制手段。ELISA檢測試驗雙抗體夾心法和競爭法有以下幾個方面的比較：原理:雙抗體夾心法：利用兩種針對抗原不同表位

PCR反應的主要物質探究2024/12/09

PCR反應的物質主要包括模板DNA、引物、dNTPs、TaqDNA聚合酶和Mg2+濃度。這些物質在PCR反應中發(fā)揮著至關重要的作用。1.引物引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則：①引物長度：15-30bp，常用為20bp左右。②引物擴增跨度：以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。③引物堿基

細胞冷凍實驗重點事項2024/12/03

細胞培養(yǎng)的傳代及日常維持過程中，在培養(yǎng)器具、培養(yǎng)液及各種準備工作方面都需大量的耗費，而且細胞一旦離開活體開始原代培養(yǎng)，它的各種生物特性都將逐漸發(fā)生變化并隨著傳代次數(shù)的增加和體外環(huán)境條件的變化而不斷有新的變化。因此及時進行細胞凍存十分必要。細胞冷凍儲存在-70℃冰箱中可以保存一年之久；細胞儲存在液氮中，溫度達-196℃，理論上儲存時間是無限的。一、實驗原理：隨著溫度降低，細胞內的酶活性會逐漸降低，到-70℃左右，酶活性幾乎為0，代謝活動停止，可以實現(xiàn)長期保存。然而，隨著溫度降低，細胞內外的水分也會

逆轉錄實驗操作重點干貨分享2024/11/25

逆轉錄（reversetranscription）是以RNA為模板合成DNA的過程，即RNA指導下的DNA合成，逆轉錄實驗包括3大要素，分別是引物、逆轉錄酶和RNA模板：1.引物：逆轉錄引物主要有3種，包括Oligo（dT）、RandomPrimers和基因特異性引物（GSP）。其中Oligo（dT）具有12-20個T堿基，并且與真核生物mRNA的3’PolyA尾配對，可合成全長的cDNA，但僅擴增有polyA尾的mRNA，對模板質量要求高，較適合克隆實驗。而RandomPrimers具有6-9

化學試劑的穩(wěn)定性論述2024/11/18

化學試劑比較容易受潮、揮發(fā)、變質，在使用化學試劑的時候必須確?；瘜W試劑有效期，才能使實驗順利進行，獲得精確的數(shù)據，但是很多情況下，化學試劑的性質決定了化學試劑的有效期，對待不同類別的化學試劑可以通過化學試劑的穩(wěn)定性來判斷化學試劑的有效期?；瘜W性質越穩(wěn)定的化學試劑，其可以保存的有效期就會越長，反之則短。而確定化學試劑的穩(wěn)定性可以通過以下幾個方面的判斷：一個物質的穩(wěn)定性,可遵循以下幾個原則:1、無機化合物,只要妥善保管,包裝完好無損,可以長期使用。但是,那些容易氧化、容易潮解的物質,在避光、蔭涼、干

ELISA試驗假陽性結果和假陰性結果解析2024/11/13

ELISA酶聯(lián)免疫吸附試驗是目前臨床上常用的免疫學檢驗方法，由于其試劑穩(wěn)定，易保存，操作簡便，結果判斷較客觀，既適宜于大規(guī)模篩查試驗，又可用于少量標本的檢測，既可以做定性試驗也可以做定量分析，目前已廣泛用于微生物學、寄生蟲學、腫瘤學和細胞因子檢測等領域。ELISA有敏感性高，特異性強，重復性好的特點，但其同時存在影響因素多的不足，現(xiàn)就實驗操作中常見的影響因素進行分析實驗，以提高的實驗質量。ELISA試驗假陽性結果和假陰性結果解析1、標本的采集與保存ELISA試劑盒當標本采集保存不當產生溶血時，紅

不同性質的培養(yǎng)基類型分述2024/10/28

培養(yǎng)基，是指供給微生物、植物或動物（或組織）生長繁殖的，由不同營養(yǎng)物質組合配制而成的營養(yǎng)基質。一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽（包括微量元素）、維生素和水等幾大類物質。那么,培養(yǎng)基根據不同性質可以分類型如下：一、化學分類1、天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基是指一類利用動物、植物或微生物體包括其提取物制成的培養(yǎng)基。例如。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、麥芽汁培養(yǎng)基和LB培養(yǎng)基等。常用的天然有機營養(yǎng)物質包括豆芽汁、玉米粉、土壤浸液、麩皮、牛奶、血清、椰子汁等。天然培養(yǎng)基成本較低，除在實驗室經常使用外，也適于用來進行工

逆轉錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR）實驗詳解2024/10/21

逆轉錄-聚合酶鏈反應(ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction，RT-PCR)的原理是：提取組織或細胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo（dT）或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板進行PCR擴增，而獲得目的基因或檢測基因表達。實驗步驟:一、總RNA的提取總RNA提取可以：（1）獲得高純度、高質量的總RNA；（2）可以滿足生物學下游實驗NorthernBlot、核酸酶保護實驗、RT-PCR、qRT-PCR和陣

細胞冷凍過程注意事項2024/10/14

一個實驗室得到一個新的細胞株后，首先要把該細胞株培養(yǎng)擴增后凍存起來。細胞凍存首先可以在由于污染等情況丟失細胞時有備份可用，另外幾乎所有細胞在培養(yǎng)傳代的過程中發(fā)生一定程度的變異，為了保持實驗結果的一致，一般細胞在培養(yǎng)幾十代以后就不能再使用了，需要將凍存的，傳代較少的細胞化凍培養(yǎng)再使用。細胞冷凍過程有四個要點：細胞的收獲、保護劑的使用、冷凍速率和儲存環(huán)境。1、細胞的收獲用來凍存的細胞一般選擇在細胞約鋪滿90%的時候，這時細胞生長狀態(tài)好，細胞數(shù)量也多，并且在收獲細胞前24小時換一次培養(yǎng)液。收獲用來凍存