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孚約生物科技(上海)有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第7年
試劑盒提取DNA2019/07/16
基因組DNA提取試劑盒簡(jiǎn)介DNA是遺傳信息的載體,是重要的生物信息分子,是分子生物學(xué)研究的主要對(duì)象,為了進(jìn)行測(cè)序、雜交、基因表達(dá)、文庫(kù)構(gòu)建等試驗(yàn),獲得高分子量和高純度的基因組DNA是非常重要的前提,因此基因組DNA的提取也是分子生物學(xué)試驗(yàn)技術(shù)中重要、基本的操作之一。Solarbio公司提供各種不同樣品基因組DNA提取試劑盒,如植物、動(dòng)物、細(xì)菌、細(xì)胞、血液、酵母等基因組DNA提取試劑盒。所提取的基因組純度高,片段大小在50kb左右。用戶可根據(jù)需要選用不同的試劑盒來進(jìn)行不同樣品的抽提。一、基因組DN
細(xì)胞計(jì)數(shù)板使用方法2019/07/02
實(shí)驗(yàn)原理:當(dāng)待測(cè)細(xì)胞懸液中細(xì)胞均勻分布時(shí),通過測(cè)定一定體積懸液中的細(xì)胞的數(shù)目,即可換算出每毫升細(xì)胞懸液中細(xì)胞的細(xì)胞數(shù)目。具體操作:1.將計(jì)數(shù)板及蓋片擦拭干凈,并將蓋片蓋在計(jì)數(shù)板。2.將細(xì)胞懸液吸出少許,滴加在蓋片邊緣,使懸液充滿蓋片和計(jì)數(shù)板之間,靜置3min,注意蓋片下不要有氣泡,也不能讓懸液流入旁邊槽中。3.計(jì)算板四大格細(xì)胞總數(shù),壓線細(xì)胞只計(jì)左側(cè)和上方的。然后按公式計(jì)算:細(xì)胞數(shù)/mL=四大格細(xì)胞總數(shù)/4×104說明:公式中除以4,因?yàn)橛?jì)數(shù)了4個(gè)大格的細(xì)胞數(shù)。公式中乘以104因?yàn)橛?jì)數(shù)板中每一個(gè)大
電泳常見問題及解決方法2019/07/02
一、顆粒(1)現(xiàn)象在烘干后的電泳涂膜表面上有手感粗糙的、較硬的粒子,或肉眼可見的細(xì)小痱子,往往被涂物的水平面較垂直面嚴(yán)重,這種漆膜病態(tài)稱為顆粒。(2)產(chǎn)生原因①CED槽液PH值偏高,堿性物質(zhì)混入,造成槽液不穩(wěn)定,樹脂析出或凝聚。②槽內(nèi)有沉淀“死角”和裸露金屬處。③電泳后清洗液臟、含漆量過高,過濾不良。④進(jìn)入的被涂物面及吊具不潔,磷化后水洗不良。⑤在烘干過程中落上顆粒狀污物。⑥涂裝環(huán)境臟。⑦補(bǔ)給涂料或樹脂溶解不良,有顆粒。(3)防治方法①將CED槽液的PH值控制在下限,嚴(yán)禁帶入堿性物質(zhì),加強(qiáng)過濾,
超純水、去離子水、RO水、蒸餾水、雙蒸水的區(qū)別2019/07/02
1.超純水:Ultrapure水(超純水),既將水中的導(dǎo)電介質(zhì)幾乎*去除,又將水中不離解的膠體物質(zhì)、氣體及有機(jī)物均去除至很低程度的水。電阻率大于18MΩ*cm,或接近18.3MΩ*cm極限值。通常實(shí)驗(yàn)室中常用NANOpure或Milli-Q制備,制水源一般為去離子水或者RO水;2.去離子水:把水里的陰陽(yáng)離子都除掉的水。主要通過RO膜和混床樹脂來把水中的離子除掉,常用制水儀有MilliporeElix,但仍然存在可溶性的有機(jī)物,比如熱源,所以去離子水一般不能用作注射用水;3.RO水:也稱純水。即通
PCR實(shí)驗(yàn)常見失敗原因、對(duì)策分析及體系優(yōu)化2019/07/01
PCR雖然為一個(gè)簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn),但在實(shí)際過程中可能會(huì)出現(xiàn)各種問題。產(chǎn)生問題的原因可能來源于以下幾個(gè)方面:實(shí)驗(yàn)操作,試劑質(zhì)量,PCR反應(yīng)過程中各種試劑的含量,以及反應(yīng)條件,溫度設(shè)置等,本文對(duì)各個(gè)方面進(jìn)行了討論,大家遇到問題后可以對(duì)號(hào)入座的查一下。當(dāng)然,具體問題的解決還依靠實(shí)驗(yàn)者就可能的原因逐項(xiàng)排除,并不斷的摸索才能*解決。假陰性,不出現(xiàn)擴(kuò)增條帶PCR反應(yīng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)有①模板核酸的制備,②引物的質(zhì)量與特異性,③酶的質(zhì)量及,④PCR循環(huán)條件。尋找原因亦應(yīng)針對(duì)上述環(huán)節(jié)進(jìn)行分析研究。模板:①模板中含有雜蛋白質(zhì),
PCR儀如何選型?2019/07/01
購(gòu)買一臺(tái)新的PCR儀,這真是件幸福的事,畢竟以后大家就不用苦苦排隊(duì)了。然而,這也不是個(gè)輕松的差事,市場(chǎng)上有那么多種儀器可以選擇,光是比較參數(shù),就夠累了。況且PCR儀還是實(shí)驗(yàn)室中的老黃牛,幾乎24小時(shí)運(yùn)轉(zhuǎn),買臺(tái)可靠的儀器尤為重要。一想到這兒,是不是更感覺壓力山大。在簽下訂單前,也許你該考慮以下五個(gè)方面。終點(diǎn)、定量還是數(shù)字?如今的PCR儀器主要分為三大類:標(biāo)準(zhǔn)PCR(終點(diǎn)PCR)、實(shí)時(shí)定量PCR(qPCR)以及數(shù)字PCR(dPCR)。前兩者大家都很熟悉,而后者是這兩年冉冉升起的新星。標(biāo)準(zhǔn)PCR儀主要
光學(xué)顯微鏡的工作原理2019/06/20
顯微鏡是一種精密的光學(xué)儀器,已有300多年的發(fā)展史。自從有了顯微鏡,人們看到了過去看不到的許多微小生物和構(gòu)成生物的基本單元——細(xì)胞。目前,不僅有能放大千余倍的光學(xué)顯微鏡,而且有放大幾十萬(wàn)倍的電子顯微鏡,使我們對(duì)生物體的生命活動(dòng)規(guī)律有了更進(jìn)一步的認(rèn)識(shí)。在普通中學(xué)生物教學(xué)大綱中規(guī)定的實(shí)驗(yàn)中,大部分要通過顯微鏡來完成,因此,顯微鏡性能的好壞是做好觀察實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵。一、顯微鏡的光學(xué)系統(tǒng)顯微鏡的光學(xué)系統(tǒng)主要包括物鏡、目鏡、反光鏡和聚光器四個(gè)部件。廣義的說也包括照明光源、濾光器、蓋玻片和載玻片等。(一)、物鏡
生物安全柜等級(jí)的劃分2019/06/20
生物安全柜是為操作原代培養(yǎng)物、菌毒株以及診斷性標(biāo)本等具有感染性的實(shí)驗(yàn)材料時(shí),用來保護(hù)操作者本人、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境以及實(shí)驗(yàn)材料,使其避免暴露于上述操作過程中可能產(chǎn)生的感染性氣溶膠和濺出物而設(shè)計(jì)的。根據(jù)生物安全防護(hù)水平的差異,生物安全柜可分為一級(jí)、二級(jí)和三級(jí)三種類型。一級(jí)生物安全柜可保護(hù)工作人員和環(huán)境而不保護(hù)樣品。其氣流原理和實(shí)驗(yàn)室通風(fēng)櫥基本相同,不同之處在于排氣口安裝有HEPA過濾器,將外排氣流過濾進(jìn)而防止微生物氣溶膠擴(kuò)散造成污染。一級(jí)生物安全柜本身無(wú)風(fēng)機(jī),依賴外接通風(fēng)管中的風(fēng)機(jī)帶動(dòng)氣流,由于不能保護(hù)柜
移液管的正確使用方法2019/06/20
1.使用前:使用移液管,首先要看一下移液管標(biāo)記、準(zhǔn)確度等級(jí)、刻度標(biāo)線位置等。應(yīng)檢查其管口和尖嘴無(wú)破損,否則不能使用。2.潤(rùn)洗:使用時(shí),應(yīng)先將移液管用純水洗凈,自然瀝干,并用待量取的溶液少許潤(rùn)洗3次,用右手的拇指和中指捏住移液管的上端,將管的下口插入待吸取的溶液中,左手將吸耳球捏扁后,接在管口上將溶液慢慢吸入,待溶液上升至移液管1/3高度時(shí)取出,橫持,并轉(zhuǎn)動(dòng)移液管,使溶液均勻布滿整個(gè)管子內(nèi)壁,以置換內(nèi)壁水分,避免管內(nèi)殘存水分稀釋要移去的溶液產(chǎn)生不必要的誤差。通常置換2-3次,每次置換結(jié)束,都要將溶
Bio-rad化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)操作規(guī)程2019/04/18
一.目的為規(guī)范Bio-rad化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)的基本操作、維護(hù)保養(yǎng)、異常處理程序,防止人為操作失誤,確保Bio-rad化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)正常運(yùn)轉(zhuǎn),特制定本程序。二.適用范圍本程序適用于Bio-rad化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)操作。三.責(zé)任1.本程序的實(shí)施者為Bio-rad化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)操作者,各實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人對(duì)本程序的實(shí)施情況進(jìn)行監(jiān)督。2.日常運(yùn)行及維護(hù)、定期維護(hù)、定期點(diǎn)檢及保養(yǎng)由Bio-rad化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)操作者負(fù)責(zé)。四.內(nèi)容1.打開成像儀器電源,將樣品放入工作臺(tái)。2.雙擊桌面上圖標(biāo),打開Quantity
PCR儀操作指南2019/03/31
一、開機(jī)連接電源線后,打開機(jī)器后部的主開關(guān)(在機(jī)器的左下角)。開機(jī)后機(jī)器進(jìn)行自檢“SelfTest”,自檢結(jié)束后出現(xiàn)用戶主界面,顯示加熱模塊“Block”格式和溫度“Temp”和熱蓋溫度“Lid”,在屏幕左上角顯示“Ready”。二、程序設(shè)置1.建立新程序按“File”→“New”→“Program”,進(jìn)入一個(gè)編輯窗口輸入程序名稱按“Enter”鍵確認(rèn),之后進(jìn)入程序編輯器;在“Header”中設(shè)置熱蓋的參數(shù),輸入溫度和壓力,溫度默認(rèn)值為96℃,一般設(shè)置為99℃,如變性溫度較低時(shí)默認(rèn)值也可以滿足使
離心機(jī)在諸多領(lǐng)域中的應(yīng)用2019/03/31
早在19世紀(jì)離心機(jī)就在工業(yè)生產(chǎn)中取得了應(yīng)用。起先,離心機(jī)應(yīng)用于牛奶分離、紡織品脫水和制糖廠結(jié)晶砂糖的脫水。目前,離心機(jī)已廣泛應(yīng)用于化工、石油、冶金和水處理等眾多領(lǐng)域。離心機(jī)的傳動(dòng)方式經(jīng)歷了從手搖式到電動(dòng)式、機(jī)械變速、油壓氣壓為動(dòng)力的機(jī)械變速直至當(dāng)今的變頻電機(jī)變速的過程。耐磨技術(shù)的不斷取得突破,如硬質(zhì)合金、陶瓷的廣泛應(yīng)用,也推動(dòng)著離心機(jī)的應(yīng)用領(lǐng)域快速拓展。3.1在聚合樹脂領(lǐng)域在處理聚氯乙烯(PVC)過程中,離心機(jī)的處理能力大可達(dá)到15~18t/h(以干粉計(jì)),分離后的清液中固體含量≤100×10-
GSP認(rèn)證的新要求2019/03/31
(一)批發(fā)企業(yè)一、管理職責(zé):1、質(zhì)量管理領(lǐng)導(dǎo)小組由企業(yè)自定設(shè)立,不作強(qiáng)制性要求。2、質(zhì)量管理小組因負(fù)責(zé)企業(yè)日常質(zhì)量管理工作,新GSP中還要求負(fù)責(zé)錄入質(zhì)量管理基礎(chǔ)數(shù)據(jù),故需設(shè)立。3、質(zhì)量驗(yàn)收組是企業(yè)物流管理環(huán)節(jié)之一,需設(shè)立。4、藥品養(yǎng)護(hù)組(員)職能有變化,主要是對(duì)儲(chǔ)存條件、儲(chǔ)存環(huán)境進(jìn)行監(jiān)測(cè)并管理。5、質(zhì)量管理文件:對(duì)操作程序提出了更高的要求,杜絕天下文章一大抄現(xiàn)象,要求結(jié)合計(jì)算機(jī)軟件編寫,能讓一個(gè)不熟悉的人員按操作程序也能完成相應(yīng)的工作(或操作)。二、人員與培訓(xùn)1、增加計(jì)算機(jī)信息管理員崗位,負(fù)責(zé)企
血漿與血清的區(qū)別2019/03/31
血清血液凝固析出的淡黃色透明液體。如將血液自血管內(nèi)抽出,放入試管中,不加抗凝劑,則凝血反應(yīng)被激活,血液迅速凝固,形成膠凍。凝血收縮,其周圍所析出之淡黃色透明液體即為血清,也可于凝血后經(jīng)離心取得。在凝血過程中,纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白塊,所以血清中無(wú)纖維蛋白原,這一點(diǎn)是與血漿大的區(qū)別。而在凝血反應(yīng)中,血小板釋放出許多物質(zhì),各凝血因子也都發(fā)生了變化。這些成分都留在血清中并繼續(xù)發(fā)生變化,如凝血酶原變成凝血酶,并隨血清存放時(shí)間逐漸減少以至消失。這些也都是與血漿區(qū)別之處。但大量未參加凝血反應(yīng)的物質(zhì)則與血漿
牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)中的作用與質(zhì)量要求2019/03/31
生物技術(shù)已經(jīng)被世界各國(guó)視為一種高技術(shù),在整個(gè)科學(xué)技術(shù)中占據(jù)了特殊的顯著地位,特別是生命科學(xué)的發(fā)展更離不生物技術(shù),生命科學(xué)的發(fā)展備受各國(guó)的重視。我國(guó)在很多大學(xué)中都設(shè)立了生命科學(xué)院?,F(xiàn)代生物技術(shù)一般認(rèn)為包括基因工程技術(shù)、細(xì)胞工程技術(shù)、酶工程技術(shù)和發(fā)酵工程技術(shù),而這些技術(shù)的發(fā)展幾乎都與細(xì)胞培養(yǎng)有密切關(guān)系,特別是在醫(yī)藥領(lǐng)域的發(fā)展,細(xì)胞培養(yǎng)更具有特殊的作用和價(jià)值。比如基因工程藥物或疫苗在研究生產(chǎn)過程中很多是通過細(xì)胞培養(yǎng)來實(shí)現(xiàn)的。基因工程乙肝疫苗很多是以CHO細(xì)胞作為載體;細(xì)胞工程中更是離不細(xì)胞培養(yǎng),雜交瘤
流式細(xì)胞儀2019/03/26
細(xì)胞凋亡的檢測(cè)方法眾多,流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡,是常用的方法。由于流式細(xì)胞儀固有的特點(diǎn)――可以準(zhǔn)確的進(jìn)行凋亡細(xì)胞的計(jì)數(shù)。因此,具有其它方法*的*性。本文主要結(jié)合我室的一些實(shí)際經(jīng)驗(yàn),力圖簡(jiǎn)單明了的介紹流式在檢測(cè)凋亡方面的應(yīng)用。下面是一幅凋亡過程圖。在凋亡誘導(dǎo)劑的作用下,首先是細(xì)胞色素C和apaf-1形成復(fù)合體,線粒體的功能發(fā)生衰退;后是caspase家族激活,磷脂酰絲氨酸外翻,這時(shí)細(xì)胞的形態(tài)已經(jīng)發(fā)生了改變,可以看到細(xì)胞變小,胞核皺縮;后是細(xì)胞內(nèi)DNA斷裂,形成凋亡小體。在凋亡發(fā)生的各個(gè)過程當(dāng)中,都有相
PCR實(shí)驗(yàn)步驟2019/03/26
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PolymeraseChainReaction,PCR)是體外酶促合成特異DNA,片段的一種方法,為常用的分子生物學(xué)技術(shù)之一。典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其主要步驟是:將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位
熒光顯微鏡的幾種熒光光源2019/03/26
熒光顯微鏡是細(xì)胞生物學(xué)的基本工具。它是由光源、濾色片和光學(xué)系統(tǒng)等主要部件組成。是利用一定波長(zhǎng)的光激發(fā)標(biāo)本發(fā)射熒光,通過物鏡和目鏡系統(tǒng)放大觀察標(biāo)本的熒光圖像而實(shí)現(xiàn)對(duì)熒光樣品的定性定量研究。激發(fā)、濾光、成像、淬滅,熒光實(shí)驗(yàn)的調(diào)整就是怎么才能協(xié)調(diào)好以上因素得到理想的效果,一個(gè)常被忽視的方面是光源的使用,熒光顯微鏡的常用光源都是白光光源:高壓汞燈和氙燈,現(xiàn)在還新出了金屬鹵素?zé)艉蚅ED。1、汞燈超高壓汞燈(50-200W),它是用石英玻璃制作,中間呈球形,內(nèi)充一定數(shù)量的汞,工作時(shí)由兩個(gè)電極間放電,引起水銀
顯微鏡的使用方法2019/03/26
顯微鏡的使用方法:1.安放:把顯微鏡放在自己前面略偏左的桌面上,這樣便于用左眼觀察物像,用右眼看著畫圖。安放時(shí)鏡筒向前,鏡臂向后。2.對(duì)光:轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器,使低倍物鏡正對(duì)通光孔,并使物鏡前端與載物臺(tái)有兩厘米左右的距離。然后把反光鏡對(duì)著光源,但是反光鏡不能直接對(duì)著太陽(yáng)。只要視野的光亮程度合適,光就對(duì)好了。3.觀察:對(duì)好光后,把顯微鏡玻片標(biāo)本放在載物臺(tái)上,并使玻片上的標(biāo)本對(duì)著通光孔的中心,再用壓片夾夾住。然后慢慢地轉(zhuǎn)動(dòng)調(diào)焦螺旋,直到接近玻片為止。接著,用左眼向目鏡內(nèi)注視,同時(shí)反方向轉(zhuǎn)動(dòng)調(diào)焦螺旋,直到看清
電子天平的選擇和使用2019/03/26
隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展,電子衡器越來越趨于自動(dòng)化和智能化。由于許多用戶沒有恰當(dāng)選擇和使用電子天平,使得電子天平與實(shí)際要求不符合,影響正常檢測(cè)工作,并造成浪費(fèi)。本人結(jié)合電子天平的技術(shù)特點(diǎn),對(duì)電子天平的選擇和使用作一分析。一.電子天平的選擇。用戶根據(jù)自己稱量的準(zhǔn)確度和量程要求,選擇合適的分度值、量程、準(zhǔn)確度級(jí)別的電子天平。1.準(zhǔn)確度要求選擇電子天平,首先應(yīng)從相應(yīng)天平的分度值是否符合稱量的準(zhǔn)確度要求考慮。在選擇電子天平的分度值時(shí),應(yīng)參考廠家給出的檢定分度值e,而不是實(shí)際分度值d。目前國(guó)家計(jì)量檢定規(guī)程規(guī)定,
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