*章 Western Blot 簡(jiǎn)介

1.1  Western Blot 原理

    與 Southern 或 Northern 雜交方法類(lèi)似，但 Western Blot 采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測(cè)物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過(guò) PAGE 分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類(lèi)型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過(guò)底物顯色或放射自顯影以檢測(cè)電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測(cè)蛋白水平的表達(dá)。

1.2  Western Blot 優(yōu)點(diǎn)

高分辨率的電泳技術(shù)

特異敏感的抗原-抗體反應(yīng)

1-5 ng 中等大小的靶蛋白

Western Blot 結(jié)合了凝膠電泳的高分辨率和固相免疫測(cè)定的特異敏感等多種優(yōu)點(diǎn)，可檢測(cè)到低至 1～

5 ng（zui低可到 10～100 pg）中等大小的靶蛋白。

1.3  Western Blot 應(yīng)用

目的蛋白的表達(dá)特性分析

目的蛋白與其它蛋白的互作

目的蛋白的組織定位

目的蛋白的表達(dá)量分析

1.4  Western Blot 成功要素