HPLC常見問題解決

來源：北京華志色譜科技有限公司 2014年08月04日 16:48

　　一、用HPLC進行分析時保留時間有時發(fā)生漂移，有時發(fā)生快速變化，原因何在?如何解決?

　　答：關(guān)于漂移問題：

　　1、溫度控制不好，解決方法是采用恒溫裝置，保持柱溫恒定

　　2、流動相發(fā)生變化，解決辦法是防止流動相發(fā)生蒸發(fā)、反應等

　　3、柱子未平衡好，需對柱子進行更長時間的平衡

　　關(guān)于快速變化問題

　　1、流速發(fā)生變化，解決辦法是重新設(shè)定流速，使之保持穩(wěn)定

　　2、泵中有氣泡，可通過排氣等操作將氣泡趕出。

　　3、流動相不合適，解決辦法為改換流動相或使流動相在控制室內(nèi)進行適當混合。

　　二、HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法?

　　答：1、樣品量不足：解決辦法為增加樣品量

　　2、樣品未從柱子中流出：可根據(jù)樣品的化學性質(zhì)改變流動相或柱子

　　3、樣品與檢測器不匹配：根據(jù)樣品化學性質(zhì)調(diào)整波長或改換檢測器

　　4、檢測器衰減太多：調(diào)整衰減即可。

　　5、檢測器時間常數(shù)太大：解決辦法為降低時間參數(shù)

　　6、檢測器池窗污染：解決辦法為清洗池窗。

　　7、檢測池中有氣泡：解決辦法為排氣。

　　8、記錄儀測壓范圍不當：調(diào)整電壓范圍即可。

　　9、流動相流量不合適：調(diào)整流速即可。

　　10、檢測器與記錄儀超出校正曲線：解決辦法為檢查記錄儀與檢測器，重作校正曲線。

　　三、做HPLC分析時，柱壓不穩(wěn)定，原因何在?如何解決?

　　答：原因可能有：

　　1、泵內(nèi)有空氣，解決的辦法是清除泵內(nèi)空氣，對溶劑進行脫氣處理;

　　2、比例閥失效，更換比例閥即可。

　　3、泵密封墊損壞，更換密封墊即可。

　　4、溶劑中的氣泡，解決的辦法是對溶劑脫氣，必要時改變脫氣方法;

　　5、系統(tǒng)檢漏，找出漏點，密封即可。

　　6、梯度洗脫，這時壓力波動是正常的。

　　四、為什么HPLC柱驗收測試時柱壓過高?

　　答：柱壓過高是HPLC柱用戶zui常碰到的問題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問題，可按下面步驟檢查問題的起因。

　　1、拆去保護柱，看柱壓是否還高，否則是保護柱的問題，若柱壓仍高，再檢查;

　　2、把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查。

　　3、將柱子的進出口反過來接在儀器上，用10倍柱體積的流動相沖洗柱子，(此時不要連接檢測器，以防固體顆粒進入流動性)。這時，如果柱壓仍不下降，再檢查;

　　4、更換柱子入口篩板，若柱壓下降，說明溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì)，正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高，請與廠商。

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