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EMC-500A高速逆流色譜儀
分離鄰二苯酚，間苯二酚流程
一． 儀器條件
1. EMC-500A高速逆流色譜儀
轉向：正向（正向定義：見儀器標識）；轉速：800轉/分鐘
2. 8823B紫外檢測器
波長254納米；靈敏度2A
3. EMC-P10泵
流量2毫升/分鐘（壓力保護值設定1mpa）
4. 3057記錄儀
紙速：6厘米/小時；量程：100mv
5. 進樣器：2毫升
二． 連接管路
連接順序：溶劑—濾頭—泵入口（下）—泵出口（上）—進樣器入口（“接輸液泵”）—進樣器出口（“接制備柱”）—主機管路入口（標記端）—主機管路出口—檢測器入口（下）—檢測器出口（上）—收集瓶（初期建議使用100ml量筒，以辨認液體分層）
注意：用手擰接頭組件（不提倡使用扳子等工具，以免超負荷損壞）連接管路完成后，泵入蒸餾水以檢查管路有無液體異常泄露。
三． 溶劑系統(tǒng)：共1000毫升
1. 正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水=1/0.8/1/0.8（V/V）（所用溶劑均為分析純）
2. 固定相：上相 流動相：下相
3. 樣品：鄰二苯酚（化學純，市售廠）
4. 間苯二酚（分析純，市售）
四． 操作過程
1. 配制溶劑系統(tǒng)
按正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水=1/0.8/10.8（V/V體積比）共1000ml，用量筒至一玻璃容器內，脫氣，分層分離。——在實驗開始前1天，將溶劑配置在同一玻璃容器（推薦磨口三角瓶）內混合震搖，注意排氣，超聲波脫氣30分鐘后，移液至同一分液漏斗密閉靜置飽和。在實驗開始前1小時內，將兩相溶劑分開放置在兩玻璃容器內，并密閉靜置，防止蒸發(fā)。
按正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水=1/0.8/10.8（V/V體積比）共1000ml，用量筒至一玻璃容器內，脫氣，分層分離。——在實驗開始前1天，將溶劑配置在同一玻璃容器（推薦磨口三角瓶）內混合震搖，注意排氣，超聲波脫氣30分鐘后，移液至同一分液漏斗密閉靜置飽和。在實驗開始前1小時內，將兩相溶劑分開放置在兩玻璃容器內，并密閉靜置，防止蒸發(fā)。
2. 樣品制備
在一玻璃容器內將預先使用天平稱量的80毫克鄰二苯酚和100毫克間苯二酚混合物溶于3毫升下相中，超聲波脫氣（溶解至溶液內無固體，如有固體應過濾，以防止塞管路），并密閉靜置，防止蒸發(fā)。
在一玻璃容器內將預先使用天平稱量的80毫克鄰二苯酚和100毫克間苯二酚混合物溶于3毫升下相中，超聲波脫氣（溶解至溶液內無固體，如有固體應過濾，以防止塞管路），并密閉靜置，防止蒸發(fā)。
3. 連接泵
將泵入口（下）連接的濾頭放入固定相（上相）瓶內，*浸入液面以下閉合泵電源開關，啟動泵，設定壓力保護值1mpa（兆帕）。按ph鍵。
設定流量：9.99ml分鐘，按L鍵，按999，使數(shù)字顯示為999，按run鍵。用9.99ml/分鐘流量向主機內泵入固定相（上相），注意管路內不要有氣體，至充滿分離柱柱體，，固定相從主機出口流出5分鐘后，停泵——按PAU鍵。迅速將泵入口（下）連接的濾頭換放入流動相（下相）溶劑瓶內，*浸入液面以下。注意管路內不要有氣體。
將泵入口（下）連接的濾頭放入固定相（上相）瓶內，*浸入液面以下閉合泵電源開關，啟動泵，設定壓力保護值1mpa（兆帕）。按ph鍵。
設定流量：9.99ml分鐘，按L鍵，按999，使數(shù)字顯示為999，按run鍵。用9.99ml/分鐘流量向主機內泵入固定相（上相），注意管路內不要有氣體，至充滿分離柱柱體，，固定相從主機出口流出5分鐘后，停泵——按PAU鍵。迅速將泵入口（下）連接的濾頭換放入流動相（下相）溶劑瓶內，*浸入液面以下。注意管路內不要有氣體。
4. 檢查主機狀態(tài)與管路狀態(tài)。
儀器主機放置在平穩(wěn)、堅實、安全的水平平面上，儀器地腳與平面間放置厚約3毫米的隔震硬橡膠板，儀器地腳調實。環(huán)境：濕度10—30攝氏度，通風良好，禁止無關人員停留與過往。遠離易燃易爆物品和場所。
打開主機上蓋，潤滑主機解繞管，加潔凈潤滑油3－4滴，輕觸機內運動部分使其正向旋轉3－4圈，以檢查有無異常。無異常，關蓋鎖緊。
儀器主機放置在平穩(wěn)、堅實、安全的水平平面上，儀器地腳與平面間放置厚約3毫米的隔震硬橡膠板，儀器地腳調實。環(huán)境：濕度10—30攝氏度，通風良好，禁止無關人員停留與過往。遠離易燃易爆物品和場所。
打開主機上蓋，潤滑主機解繞管，加潔凈潤滑油3－4滴，輕觸機內運動部分使其正向旋轉3－4圈，以檢查有無異常。無異常，關蓋鎖緊。
5. 調整紫外檢測器
詳見紫外檢測器說明書調整紫外檢測器波長到254nm：（在切斷市電的情況下）解脫紫外檢測器光源插頭座，旋開光源固定螺母，取出空心陰極燈，用紫外檢測器工具將擋圈選下，取出（出廠時已裝上的）280nm濾光片。裝入透紫玻璃，將擋圈旋緊，再將燈放回原處，旋緊光源固定螺母，接好光源插頭座。將波長轉換開關置于254處。小心安妥保管280nm濾光片，并做標記（注：在不使用280nm燈時，均應/可置于254處——衰減大）紫外檢測器-在逆流色譜儀主機運轉開始前40分鐘通電預熱。
詳見紫外檢測器說明書調整紫外檢測器波長到254nm：（在切斷市電的情況下）解脫紫外檢測器光源插頭座，旋開光源固定螺母，取出空心陰極燈，用紫外檢測器工具將擋圈選下，取出（出廠時已裝上的）280nm濾光片。裝入透紫玻璃，將擋圈旋緊，再將燈放回原處，旋緊光源固定螺母，接好光源插頭座。將波長轉換開關置于254處。小心安妥保管280nm濾光片，并做標記（注：在不使用280nm燈時，均應/可置于254處——衰減大）紫外檢測器-在逆流色譜儀主機運轉開始前40分鐘通電預熱。
6. 啟動主機：
將后面板轉向開關置于“正向”處、閉合速度控制其電源開關：緩慢調節(jié)多圈電位器旋鈕調整控制器指針（順時為加速，逆時為減速），顯示表指針預定位置，一般取轉速800轉/分鐘。
泵入流動相：設定流量：2.0ml/min。按L鍵，按200，使數(shù)字顯示為200，按run鍵。
注意：在泵入流動相的全部時間內，要求保證泵入口（下）連接的濾頭始終*進入流動相（下相）溶劑瓶內液面以下。
將后面板轉向開關置于“正向”處、閉合速度控制其電源開關：緩慢調節(jié)多圈電位器旋鈕調整控制器指針（順時為加速，逆時為減速），顯示表指針預定位置，一般取轉速800轉/分鐘。
泵入流動相：設定流量：2.0ml/min。按L鍵，按200，使數(shù)字顯示為200，按run鍵。
注意：在泵入流動相的全部時間內，要求保證泵入口（下）連接的濾頭始終*進入流動相（下相）溶劑瓶內液面以下。
7. 調整紫外檢測器靈敏度
閉合紫外檢測器電源開關，預熱完成后，當流動相進入紫外檢測器吸收池中，將量程范圍調節(jié)鈕旋至T檔，調節(jié)透過率調節(jié)旋鈕，使數(shù)字顯示5（mv）-量程低點。T透過率。A吸收度（透過率負對數(shù)），數(shù)值是以A檔為基準的倍率。紫外檢測器與記錄儀信號連線時應紅線對紅插座，黑線對黑插座。
閉合紫外檢測器電源開關，預熱完成后，當流動相進入紫外檢測器吸收池中，將量程范圍調節(jié)鈕旋至T檔，調節(jié)透過率調節(jié)旋鈕，使數(shù)字顯示5（mv）-量程低點。T透過率。A吸收度（透過率負對數(shù)），數(shù)值是以A檔為基準的倍率。紫外檢測器與記錄儀信號連線時應紅線對紅插座，黑線對黑插座。
8. 閉合記錄儀電源開關
設定記錄儀：紙速：6厘米/小時。量程：100mv?；€，5mv。并放下記錄筆。
設定記錄儀：紙速：6厘米/小時。量程：100mv?；€，5mv。并放下記錄筆。
9. 進樣（將樣品液體裝進到進樣器定量管內）
調整進樣器狀態(tài)使手柄在“進樣”標記位。用潔凈針筒針頭吸取全部樣品液體，排除針筒、針筒針頭內全部氣體，旋松進樣器的“進樣器”標記處管路口處“？”筒的針頭刺入并連接在進樣器的“進樣器”標記處管路口上。用手旋緊進樣器的“進樣器”標記處管路口處“外六方金屬體”
推進針筒內全部樣品液體到進樣器定量管內（使液體從進樣器“溢出”標記處管路溢出，以便排除管路氣體）。
在樣品進入定量管內到樣品進入柱管前的期間內，注意不要使樣品流失。??！
調整進樣器狀態(tài)使手柄在“進樣”標記位。用潔凈針筒針頭吸取全部樣品液體，排除針筒、針筒針頭內全部氣體，旋松進樣器的“進樣器”標記處管路口處“？”筒的針頭刺入并連接在進樣器的“進樣器”標記處管路口上。用手旋緊進樣器的“進樣器”標記處管路口處“外六方金屬體”
推進針筒內全部樣品液體到進樣器定量管內（使液體從進樣器“溢出”標記處管路溢出，以便排除管路氣體）。
在樣品進入定量管內到樣品進入柱管前的期間內，注意不要使樣品流失。??！
10. 進樣/接柱
在流動相從檢測器出口流出后，將進樣器狀態(tài)調整至“接柱”標記——進樣：進樣器定量管內樣品液體接進到主機分離柱管系統(tǒng)內。進樣后約3小時第二峰出完。
在1進樣同時，2啟動記錄儀走紙按鍵，3放下紀錄筆，4調整記錄儀狀態(tài)至走紙，5按回零/測量按鍵兩次，在記錄紙上做標記，并確認處于測量狀態(tài)。6檢查泵運行狀態(tài)，確認泵出的液體正常流出。7紀錄實驗各項參數(shù)，時間，狀態(tài)等。
收集檢測器出口流出液體。以環(huán)保方式處理和保管廢棄液體。建議：液體暫裝容器采用透明無色玻璃，并適當密閉
在流動相從檢測器出口流出后，將進樣器狀態(tài)調整至“接柱”標記——進樣：進樣器定量管內樣品液體接進到主機分離柱管系統(tǒng)內。進樣后約3小時第二峰出完。
在1進樣同時，2啟動記錄儀走紙按鍵，3放下紀錄筆，4調整記錄儀狀態(tài)至走紙，5按回零/測量按鍵兩次，在記錄紙上做標記，并確認處于測量狀態(tài)。6檢查泵運行狀態(tài)，確認泵出的液體正常流出。7紀錄實驗各項參數(shù)，時間，狀態(tài)等。
收集檢測器出口流出液體。以環(huán)保方式處理和保管廢棄液體。建議：液體暫裝容器采用透明無色玻璃，并適當密閉
圖 EMC-500A-HSCCC分離間苯二酚和鄰苯二酚的色譜圖
五． 試驗結束
逆時針調整多調速器圈電位器旋鈕歸零，關斷逆流色譜儀調速器開關，主機運轉停止。管段記錄儀，紫外檢測器電源等開關。因儀器系統(tǒng)能耗不大，建議各儀器市電插頭集中就近插放。
實驗完畢，立即使用5-10kg壓力的潔凈空氣排出逆流色譜儀主機儀器內大部分液體，潔凈空氣由主機入口（標記端）管路接入。然后大流量泵入潔凈液體沖洗儀器內殘留液體。沖洗過程中多次斷續(xù)切換進樣器狀態(tài)，以沖洗進樣器。
主機內殘留液體沖洗完畢，切斷各儀器電源。針頭可留在進樣器的“進樣器”標記處管路口處，將針管脫離取下。
保留逆流色譜儀主機內潔凈液體，待近期下次使用。如近期（1個月以內）不使用逆流色譜儀，需使用潔凈空氣排出逆流色譜儀主機儀器內全部液體，使用壓力0.5-1Mpa,持續(xù)時間≧40分鐘，保留泵內潔凈液體，將泵的液體管路出入口均置于同一容器液體內，待近期下次使用。
六． 提示與警告
慎用或禁用：
1． 含有鹽類的液體溶劑系統(tǒng)。
2． 含有易于結晶、沉淀、粘稠的液體溶劑系統(tǒng)與樣品。——上述溶劑系統(tǒng)極易于阻塞工作管路，造成儀器的*性損壞。
3． 當工作鼓內缺少液體時禁止儀器運轉。
提示：
1. 寒冷的地區(qū)/季節(jié)/室內，建議給液體和儀器適當溫度，以避免內部結晶。
2. 每一次泵入液體前，務必檢查/設定泵的壓力保護值1Mpa.
3. 變換溶劑系統(tǒng)后，檢查/調整平衡。出廠時的配重溶劑系統(tǒng)比重r=1。
4. HSCCC是高速旋轉類儀器，請用戶對操作者給以明確的安全使用指導。
5. 會影響記錄曲線美觀的因素：在壓力和溫度變化時，液體和樣品內析出的氣體。樣品顏色。
保管：儀器存放于0℃以上的潔凈通風室內。
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