空白對(duì)照的定義及其在ELISA測(cè)定中的應(yīng)用

空白對(duì)照是指在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中設(shè)置的一種陰性對(duì)照，旨在監(jiān)測(cè)非特異性背景信號(hào)，并為基線吸光度值提供參考。在酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）中，通過引入空白對(duì)照，可以有效識(shí)別并扣除樣品讀數(shù)中的背景噪聲，從而提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。然而，在多分析物ELISA測(cè)定中，由于其固有的高背景信號(hào)特性，這種標(biāo)準(zhǔn)化方法可能并不適用。本文將詳細(xì)探討為何在Cygnus的ELISA測(cè)定中通常不建議使用空白對(duì)照。

減去背景值對(duì)多分析物ELISA檢測(cè)結(jié)果的影響

在多分析物ELISA測(cè)定中，如HCP ELISA，由于HCP抗體的復(fù)雜性，其背景信號(hào)通常較高。這使得此類檢測(cè)的基線吸光度值（OD值）普遍高于簡單的單分析物檢測(cè)。從統(tǒng)計(jì)學(xué)角度來看，從樣品讀數(shù)中減去較高的基線OD值可能會(huì)增加數(shù)據(jù)的變異程度，從而影響結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

以下示例說明了背景值扣除對(duì)變異系數(shù)的影響。在表1中，標(biāo)準(zhǔn)A的平均OD值為0.100，標(biāo)準(zhǔn)B的平均OD值為0.150 。當(dāng)通過原始讀數(shù)減去空白對(duì)照的OD值來計(jì)算變異系數(shù)（CV）時(shí)，CV值顯著上升，導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)B的CV%從6.7%增加至20%。

表1. 背景值扣除對(duì)變異系數(shù)的影響

檢測(cè)背景值越高，對(duì)變異系數(shù)百分比的影響就越大。

表2展示了8種不同ELISA試劑盒在10組隨機(jī)數(shù)據(jù)集中的平均變異系數(shù)（CV%）?；谠糘D值計(jì)算得出的CV%范圍為10%至20%，而經(jīng)過空白對(duì)照校正后的相同數(shù)據(jù)CV%則超過了20%。在所有情況下，經(jīng)過空白對(duì)照校正后的CV%均高于未校正的數(shù)據(jù)。在實(shí)際應(yīng)用中，分析數(shù)據(jù)放行的標(biāo)準(zhǔn)通常要求重復(fù)檢測(cè)的CV%不超過20%，上述差異可能直接導(dǎo)致分析結(jié)果無法滿足精密度要求，從長遠(yuǎn)來看，引入空白對(duì)照將直接導(dǎo)致測(cè)試結(jié)果無法符合放行要求。

表2. 經(jīng)過空白對(duì)照校正后的CV%與未校正數(shù)據(jù)的CV%值對(duì)比

從統(tǒng)計(jì)學(xué)角度來看，空白對(duì)照的OD值越高，出現(xiàn)此類問題的可能性就越大。

鑒于上述原因，Cygnus Technologies 致力于開發(fā)和提供無需背景校正的 ELISA 試劑盒。在我們已上市的 ELISA 試劑盒開發(fā)、分析及測(cè)試過程中，從未在批次放行的工作流程中引入空白對(duì)照校正步驟。相反，我們使用 0 ng/mL 標(biāo)準(zhǔn)品來設(shè)定 Y 軸截距并確定標(biāo)準(zhǔn)曲線的下限。因此，如果您在實(shí)驗(yàn)流程中加入了空白對(duì)照校正步驟，其獲得的檢測(cè)變異系數(shù)（CV）百分比很可能會(huì)高于 Cygnus 質(zhì)控團(tuán)隊(duì)所記錄的結(jié)果。Cygnus針對(duì)每一種檢測(cè)試劑盒均提供相應(yīng)的QS（Qualification Summary）文件，如有需求歡迎點(diǎn)擊這里填寫信息索取，或直接聯(lián)系Cygnus中國總代理西美杰。如您在使用Cygnus HCP ELISA試劑盒的過程中遇到任何問題，我們的技術(shù)支持團(tuán)隊(duì)將竭誠為您提供解決方案和建議。