【原理概述】 

本試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴(kuò)增技術(shù)：在常溫恒溫下（一般為 39 oC~42 oC）， 在輔助蛋白和單鏈結(jié)合蛋白的幫助下，重組酶和引物形成復(fù)合體；進(jìn)行同源搜索并結(jié)合目的同源域，此時在該同源位置形成D-loop 區(qū)并開始進(jìn)行鏈交換；伴隨著重組酶從復(fù)合體上解離，聚合酶也結(jié)合到引物的 3’末端，開始鏈的延伸。依賴nfo 酶的作用，加入根據(jù)模板設(shè)計的特異的分子探針，使用膠體金技術(shù)（三明治夾心法）可以對最終結(jié)果進(jìn)行檢測。

【產(chǎn)品特點(diǎn)】 

本試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、反應(yīng)時 間短（僅需 15 min）等優(yōu)點(diǎn)，反應(yīng)組分為干粉狀態(tài)，操作簡便，易于保存。 本試劑對設(shè)備要求低，金屬浴、水浴鍋等即 可進(jìn)行反應(yīng)操作，無需購買 PCR 擴(kuò)增儀等 價格高昂的專屬設(shè)備。

【引物設(shè)計】 

建議使用長度在30-35 bp 的引物，引物過短會影響擴(kuò)增速度和檢測靈敏度；下游引物的 5’端標(biāo)記一個修飾基團(tuán)（常用生物素）。引物設(shè)計避免形成二級結(jié)構(gòu)而影響擴(kuò)增；擴(kuò) 增子長度建議在150-500 bp。

【膠體金探針設(shè)計】

在上下游引物中間，設(shè)計一段長度為46-52nt 與目的片段互補(bǔ)的序列；5’端修飾一個抗原 標(biāo)記（典型 FAM）；在 5’端和 3’末端的中部 位置標(biāo)記一個 dSpacer（四氫呋喃，THF）， 作為 nfo 的識別位點(diǎn)；3’末端標(biāo)記一個修飾 基團(tuán)，例如胺基、磷酸基團(tuán)或 C3-Spacer 等。

【試劑盒儲存】 

1．儲存條件：儲存溫度 ≤ -20 °C 恒溫環(huán)境， 避光保存，避免重壓； 

2．產(chǎn)品有效期：14 個月； 

3．生產(chǎn)日期見外包裝。

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