前 言
AKT激活是多種生命活動(dòng)及疾病的信號(hào)中樞,而AKT Ser473位的磷酸化是AKT完-全激活的必要步驟。AKT抑制劑藥物三期臨床實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明其能有效延長(zhǎng)荷爾蒙受體陽(yáng)性乳腺癌患者的無(wú)進(jìn)展生存期。在AKT相關(guān)研究中,磷酸化抗體是最重要的工具之一。
01 AKT分子機(jī)制
AKT的蛋白名為RAC-alpha serine/threonine-protein kinase或Protein kinase B (PKB)。AKT在所有人源細(xì)胞類(lèi)型中皆有表達(dá),人源AKT激酶有三種:AKT1、AKT2、AKT3,三種AKT同源性較高,結(jié)構(gòu)域類(lèi)似。AKT N端有pleckstrin homology (PH) 結(jié)構(gòu)域,能夠和PIP3結(jié)合,C端包含激酶結(jié)構(gòu)域(KD)和C末端結(jié)構(gòu)域(CTD)。
AKT蛋白結(jié)構(gòu)(圖片源自doi.org/10.1186/s13045-021-01137-8)
靜息狀態(tài)下,AKT的PH結(jié)構(gòu)域和C端激酶結(jié)構(gòu)域靠近(PH-in構(gòu)象),抑制AKT激活。當(dāng)細(xì)胞接受PDGFa、IGF1等多種細(xì)胞因子刺激后,通過(guò)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),PI3K將PI4,5P2轉(zhuǎn)變?yōu)镻IP3。AKT的PH結(jié)構(gòu)域與PIP3結(jié)合,釋放C端激酶結(jié)構(gòu)域(PH-out構(gòu)象)。其后,PDK1磷酸化AKT1的308位蘇氨酸,初步激活A(yù)KT,然后mTORC2磷酸化AKT1的473位絲氨酸(對(duì)應(yīng)AKT2 Ser474,AKT3 Ser472)。AKT1 Ser473位的磷酸化對(duì)于T308位磷酸化的維持有重要作用,是AKT完-全激活的標(biāo)志。
AKT激活過(guò)程(圖片源自doi.org/10.1016/j.cell.2017.04.001)
AKT能夠激活包括mTORC1、GSK3β、FOXO在內(nèi)的100多種底物,是信號(hào)通路的中-央樞紐之一,調(diào)控了細(xì)胞及機(jī)體的代謝、生存、增殖。在多種腫瘤中,AKT的正向調(diào)控原件PI3K往往產(chǎn)生突變,異常激活,而負(fù)向調(diào)控原件PTEN突變失活,這最終導(dǎo)致了AKT的過(guò)度激活,增強(qiáng)了腫瘤細(xì)胞的生存遷移能力。因此,以AKT為靶點(diǎn)的治療藥物是研發(fā)熱點(diǎn)。
02 AKT抑制劑研究進(jìn)展
在乳腺癌等多種腫瘤中,由于上游調(diào)控原件PI3K異常激活或PTEN的突變失活,AKT會(huì)持續(xù)激活,開(kāi)啟下游一系列信號(hào)通路,進(jìn)而增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移能力。Capivasertib是一種吡咯嘧啶衍生的化合物,能夠和AKT的ATP結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合,導(dǎo)致AKT無(wú)法磷酸化底物,抑制下游信號(hào)通路。Capivasertib能夠在10nM級(jí)別抑制所有AKT激酶(AKT1 IC50=3nM,AKT2 IC50=7nM,AKT3 IC50=7nM)。
2023年6月1日,英國(guó)癌癥研究院等在新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志上發(fā)表了Capivasertib的三期臨床試驗(yàn)結(jié)果。該試驗(yàn)?zāi)技?08例荷爾蒙受體陽(yáng)性、表皮生長(zhǎng)因子2型受體陰性的進(jìn)展期乳腺癌患者,與僅接受fulvestrant治療的患者(無(wú)進(jìn)展生存期PFS=3.6 Months)相比,接受Capivasertib-fulvestrant聯(lián)合治療的患者無(wú)進(jìn)展生存期(7.2 Months)顯著增強(qiáng)(HR=0.6, 95% CI:0.51-0.71, P<0.001)。該結(jié)果為Capivasertib-fulvestrant療法以及其他AKT靶點(diǎn)藥物開(kāi)發(fā)提供了光明前景。
03 AKT ser473磷酸化抗體
無(wú)論是生理研究,還是病理研究中,AKT Ser473的磷酸化都是AKT是否激活的關(guān)鍵指標(biāo),是相關(guān)信號(hào)通路研究中必-不可少的檢測(cè)靶點(diǎn)。相比于普通抗體,磷酸化抗體不僅需要識(shí)別特定的蛋白,還需要識(shí)別是否在蛋白的特定氨基酸上發(fā)生磷酸化。AKT Ser47磷酸化抗體能夠特異性的檢測(cè)AKT是否在第473位的絲氨酸發(fā)生磷酸化。
義翹神州現(xiàn)在推出AKT Ser473磷酸化抗體(Cat: 110591-R0113)。通過(guò)自有的兔單B流式分選技術(shù)制備的兔單克隆抗體具有高特異性(內(nèi)源性驗(yàn)證、競(jìng)爭(zhēng)驗(yàn)證)、高靈敏度(1:200000)等特點(diǎn)。
?義翹神州磷酸化抗體驗(yàn)證數(shù)據(jù)
內(nèi)源性驗(yàn)證
Western blot analysis of extracts from serum-starved NIH-3T3, untreated (-); treated with PDGFA (Cat: 13081-H07Y) (5 μg/mL, 5 min; +), using Phospho-AKT (Ser473) rabbit monoclonal Antibody (Cat: 110591-R0113) at 1:2000 dilution (upper) or anti-Akt antibody (lower).
Western blot analysis of extracts from serum-starved A431, untreated (-); treated with EGF (Cat: GMP-10605-HNAE) (200 ng/mL, 15 min; +), using Phospho-AKT (Ser473) rabbit monoclonal Antibody (Cat: 110591-R0113) at 1:2000 dilution (upper) or anti-Akt antibody (lower).
特異性驗(yàn)證
Western blot analysis of extracts from serum-starved NIH-3T3, untreated (line A); treated with PDGFA (Cat: 13081-H07Y) (5 μg/mL, 5 min), without peptide (line B) or antigen-specific phosphopeptide (line C) or antigen-specific peptide (line D) using Phospho-AKT (Ser473) rabbit monoclonal Antibody (Cat: 110591-R0113) at 1:2000 dilution.
超高稀釋度
Western blot analysis of extracts from serum-starved NIH-3T3 treated with PDGFA (Cat: 13081-H07Y) (5 μg/mL, 5 min; +), using Phospho-AKT (Ser473) rabbit monoclonal Antibody (Cat: 110591-R0113) at 1:1000, 1:50000, 1:200000 dilution.
磷酸化抗體相關(guān)產(chǎn)品 | |
貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱(chēng) |
13081-H07Y | PDGFA Protein, Human, Recombinant (His Tag) |
GMP-10605-HNAE | EGF Protein, Human, Recombinant (ECD), HPLC-verified |
110396-R0001 | Recombinant Phospho-p70 S6 Kinase 1 (Thr389) Antibody, Rabbit Monoclonal |
10099-T38
| Anti-S6K1/RPS6KB1 Antibody, Rabbit Polyclonal
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【參考文獻(xiàn)】
1. Andrikopoulou, A., et al. The emerging role of capivasertib in breast cancer. Breast, 2022. doi.org/10.1016/j.breast.2022.03.018
2. Davies, B. R., et al. Preclinical pharmacology of AZD5363, an inhibitor of AKT: pharmacodynamics, antitumor activity, and correlation of monotherapy activity with genetic background. Mol Cancer Ther, 2012. doi.org/10.1158/1535-7163.Mct-11-0824-t
3. Hua, H., et al. Targeting Akt in cancer for precision therapy. J Hematol Oncol, 2021, doi.org/10.1186/s13045-021-01137-8
4. Manning, B. D., & Toker, A. AKT/PKB Signaling: Navigating the Network. Cell, 2017, 381-405. doi.org/10.1016/j.cell.2017.04.001
5. Turner, N. C., et al. Capivasertib in Hormone Receptor-Positive Advanced Breast Cancer. N Engl J Med, 2023. doi.org/10.1056/NEJMoa2214131
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