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人流行性出血熱(漢坦病毒)IgG/IgM ELISA試劑盒

來源:深圳市科潤達(dá)生物工程有限公司   2012年01月10日 09:26  


 

流行性出血熱(漢坦病毒)IgG/IgM ELISA試劑盒
(德國IBL*,貨號(hào):RE57451)
德國IBL中國*代理商“深圳科潤達(dá)生物工程有限公司”竭誠為您服務(wù)
 


預(yù)期用途

此酶免試劑盒可用于流行性出血熱(EHF)病人血清中抗?jié)h坦病毒IgG和IgM的定性檢測(cè)。
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前言簡(jiǎn)介
流行性出血熱(EHF)又稱腎病綜合征出血熱(HFRS),是由漢坦病毒(Hantaan type)引起的。與流行性腎病相比(因近距離接觸普馬拉病毒而被傳染),HFRS的傳染性更嚴(yán)重,一般都會(huì)伴隨有尿毒癥、呼吸麻痹和伴隨有典型休克綜合癥的出血,甚至死亡。這種疾病起初的癥狀是流行性感冒樣癥狀。HFRS起初的典型癥狀是血小板減少癥和白細(xì)胞增多癥。漢坦病毒主要分布于亞洲和巴爾干各邦地區(qū),通過直接接觸嚙齒動(dòng)物、嚙齒動(dòng)物的排泄物或分泌物而傳染給人。士兵、農(nóng)民和露營者都特別容易受到危險(xiǎn)。
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實(shí)驗(yàn)原理
包被孔中包被了重組的漢灘型漢坦病毒核殼體蛋白。在檢測(cè)IgM抗體時(shí),為了避免由IgG抗體或類風(fēng)濕因子引起的非特異性因素的干擾,病人血清必須與類風(fēng)濕因子IgG吸附劑一起孵育。
實(shí)驗(yàn)過程孵育期間,抗重組漢坦病毒抗原的特異性抗體會(huì)結(jié)合到固相包被板上。洗板后,我們分別用過氧化酶標(biāo)記的抗人IgG和IgM抗體檢測(cè)特異性的IgG和IgM。加入底物液后顯色,溶液所顯示的顏色強(qiáng)度與結(jié)合的抗體量成正比。之后用酶標(biāo)儀讀取OD值。
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貯存及穩(wěn)定性
試劑盒應(yīng)當(dāng)在2~8℃運(yùn)輸和儲(chǔ)存,避免高溫和陽光直射,沒有打開的試劑能保存到有效期。包被條在封閉的袋子內(nèi)2~8℃能保存到有效期。準(zhǔn)備好的試劑的儲(chǔ)存及其穩(wěn)定性在相應(yīng)章節(jié)已闡明。
開封的微孔板密封放置2-8℃下可保存至有效期
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樣品采集和貯存
人血清

注意靜脈穿刺采集全血的常規(guī)注意事項(xiàng)。從采集到血液樣品的那一刻起到檢測(cè)時(shí)都應(yīng)保持血液樣品的化學(xué)整體性。不要使用明顯溶血、黃疸的和脂血樣品。如果樣品出現(xiàn)混濁,則在實(shí)驗(yàn)前應(yīng)當(dāng)離心以除去所有的微粒物質(zhì)。此試驗(yàn)要采用人血清樣本
儲(chǔ)存 2-8℃ ≤-20℃ 避免熱源和太陽直射,避免反復(fù)凍溶。
穩(wěn)定性 5天 12mon
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試劑盒成分
規(guī)格 符號(hào) 成分
1 x 12 x 8 MTP 微孔反應(yīng)板
即用,可分拆.預(yù)包被有重組漢灘型抗原(strain: CG 76-118)
1 x 750 µL ANTI IgG CONJ CONC 酶聯(lián)物(20倍濃縮)
過氧化酶標(biāo)記抗IgG
1 x 750 µL ANTI IgM CONJ CONC 酶聯(lián)物(20倍濃縮)
過氧化酶標(biāo)記抗IgM
1 x 1.5 mL CONTROL + IgG 陽性質(zhì)控IgG
即用.內(nèi)含:人血清,穩(wěn)定劑,防腐劑
1 x 1.5 mL REFCONTROL IgG 參考對(duì)照質(zhì)控IgG
即用.內(nèi)含:人血清,穩(wěn)定劑,防腐劑
1 x 1.5 mL CONTROL + IgM 陽性質(zhì)控IgM
即用.內(nèi)含:人血清,穩(wěn)定劑,防腐劑
1 x 15 mL DILBUF CONC 樣品稀釋緩沖液(20倍濃縮)
紅色瓶蓋.內(nèi)含:PBS,pH7.4,清潔劑和0.01%的硫柳汞
1 x 1.5 mL REFCONTROL IgM 參考對(duì)照質(zhì)控IgM
即用.內(nèi)含:人血清,穩(wěn)定劑,防腐劑
1 x 1.9 mL CONTROL- 陰性質(zhì)控
即用.內(nèi)含:人血清,穩(wěn)定劑,防腐劑
1 x 100 mL WASHBUF CONC 洗滌液(10倍濃縮)
內(nèi)含:PBS緩沖液
1 x 1.5 mL RE-AB 類風(fēng)濕因子吸附劑
即用.內(nèi)含抗-人IgG, 穩(wěn)定劑,防腐劑
1 x 12 mL TMB SUBS TMB底物液
即用.內(nèi)含:TMB
1 x 12 mL TMB STOP TMB終止液
即用.內(nèi)含0.5 M 硫酸
1 x FOIL 膠粘薄膜
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實(shí)驗(yàn)做需器材但試劑盒沒提供
 

  • 微移液管  體積(5; 20; 50; 100; 200; 1000 µL)
  • 渦旋混合器
  • 保溫箱, 37°C
  • 試管(用于樣品稀釋)
  • 8道微量移液器
  • 洗瓶,自動(dòng)或半自動(dòng)洗板機(jī)
  • 酶標(biāo)儀
  • 雙蒸水或去離子水
  • 吸水紙,吸嘴,計(jì)時(shí)器

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實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
實(shí)驗(yàn)前將試劑盒平衡至室溫(18-25°C).含結(jié)晶的緩沖濃縮液可在37°C下迅速將其溶解.實(shí)驗(yàn)前將其冷卻至至室溫(18-25°C)
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稀釋濃宿成分的準(zhǔn)備(以測(cè)32孔為例)

提示:實(shí)驗(yàn)前取所需量試劑,并迅速用于稀釋.

濃縮液
(示例)
組分 體積 稀釋液 比例 備注 存儲(chǔ) 穩(wěn)定性
3mL DILBUF CONC 57mL 去離子水 1:20 充分混勻 2-8°C 1周
10 mL WASHBUF CONC 90 mL 去離子水 1:10 充分混勻 2-8°C 8周
200 µL ANTI IgG CONJ CONC
OR
ANTI IgM CONJ CONC
3.8 mL 稀釋洗滌液 1:20 充分混勻 - 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后倒掉
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樣品稀釋
  稀釋   比例 備注   穩(wěn)定性
IgG樣品 常規(guī) 稀釋樣品稀釋液 1:201 10 µL+2000 µL 2-8°C 6周
IgM樣品 常規(guī) 稀釋樣品稀釋液 1:201 10 µL+2000 µL
加15 µL類風(fēng)濕因子吸附劑至250 µL稀釋血清樣品, 18-25°C孵育30分鐘)
2-8°C 6周
提示:未稀釋樣品可于-20°C下保持?jǐn)?shù)月
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實(shí)驗(yàn)步驟
1.將100μl即用型陽性質(zhì)控、陰性質(zhì)控、參考對(duì)照質(zhì)控和稀釋血清樣品(如是IgM樣品,需用類風(fēng)濕因子吸附劑前處理)加入到相應(yīng)的微孔中。
2.膠粘薄膜蓋板,37℃下溫育45分鐘。
3.移除膠粘薄膜, 棄除孔內(nèi)反應(yīng)液.每孔加入300μl稀釋洗滌液,重復(fù)洗板4次,在吸水紙上拍干去除殘留液滴。
4.每孔中加入100μl稀釋酶聯(lián)物(IgG 或IgM)
5.膠粘薄膜蓋板。37℃下溫育45分鐘.
6.移除膠粘薄膜, 棄除孔內(nèi)反應(yīng)液.每孔加入300μl稀釋洗滌液,重復(fù)洗板4次,在吸水紙上拍干去除殘留液滴。
7.加底物液和終止液,建議用8道微移液器,保證加液相等的時(shí)間間隔。避免產(chǎn)生氣泡。
8.每孔中加入100μl TMB底物液
9.室溫(18-25°C)溫育10分鐘
10.每孔中加入100μl終止液終止底物液反應(yīng)。
11.20分鐘內(nèi)于酶標(biāo)儀450nm處讀取OD值。(參考波長:650nm)
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8、結(jié)果計(jì)算
用病人樣品的OD值比上參考對(duì)照質(zhì)控的OD值計(jì)算檢驗(yàn)結(jié)果
A病人樣品/ A參考對(duì)照質(zhì)控= Q
 
 

  • IgG抗體:

Q<1 陰性:沒有檢測(cè)到抗?jié)h灘型漢坦病毒IgG抗體
1≤Q≤1.5 可疑灰色區(qū)域,不能明確說明結(jié)果,10天之后應(yīng)當(dāng)對(duì)疾病的病程進(jìn)行再次檢測(cè)。如果疑似病人感染了漢坦病毒,我們建議您對(duì)檢測(cè)的樣品也檢測(cè)下漢灘病毒(Hantaan)IgM抗體或檢測(cè)下普馬拉(Puumala)病毒抗體。
Q>1.5 陽性:檢測(cè)到抗?jié)h灘病毒特異性IgG抗體

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IgM抗體:

Q<1 陰性:沒有檢測(cè)到抗?jié)h灘型漢坦病毒IgM抗體
1≤Q≤2 可疑灰色區(qū)域,不能明確說明結(jié)果,10天之后應(yīng)當(dāng)對(duì)疾病的病程進(jìn)行再次檢測(cè)。如果疑似病人感染了漢灘病毒,我們建議您對(duì)檢測(cè)的樣品也檢測(cè)下普馬拉病毒(Puumala)抗體。
Q>2 陽性:檢測(cè)到抗?jié)h坦病毒特異性IgM抗體
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本譯文僅供參考,詳情請(qǐng)以原文為準(zhǔn)。
 
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