流行性出血熱（漢坦病毒）IgG/IgM ELISA試劑盒
（德國IBL*，貨號(hào)：RE57451）
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預(yù)期用途
此酶免試劑盒可用于流行性出血熱（EHF）病人血清中抗?jié)h坦病毒IgG和IgM的定性檢測(cè)。
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前言簡(jiǎn)介
流行性出血熱（EHF）又稱腎病綜合征出血熱（HFRS），是由漢坦病毒（Hantaan type）引起的。與流行性腎病相比（因近距離接觸普馬拉病毒而被傳染），HFRS的傳染性更嚴(yán)重，一般都會(huì)伴隨有尿毒癥、呼吸麻痹和伴隨有典型休克綜合癥的出血，甚至死亡。這種疾病起初的癥狀是流行性感冒樣癥狀。HFRS起初的典型癥狀是血小板減少癥和白細(xì)胞增多癥。漢坦病毒主要分布于亞洲和巴爾干各邦地區(qū)，通過直接接觸嚙齒動(dòng)物、嚙齒動(dòng)物的排泄物或分泌物而傳染給人。士兵、農(nóng)民和露營者都特別容易受到危險(xiǎn)。
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實(shí)驗(yàn)原理
包被孔中包被了重組的漢灘型漢坦病毒核殼體蛋白。在檢測(cè)IgM抗體時(shí)，為了避免由IgG抗體或類風(fēng)濕因子引起的非特異性因素的干擾，病人血清必須與類風(fēng)濕因子IgG吸附劑一起孵育。
實(shí)驗(yàn)過程孵育期間，抗重組漢坦病毒抗原的特異性抗體會(huì)結(jié)合到固相包被板上。洗板后，我們分別用過氧化酶標(biāo)記的抗人IgG和IgM抗體檢測(cè)特異性的IgG和IgM。加入底物液后顯色，溶液所顯示的顏色強(qiáng)度與結(jié)合的抗體量成正比。之后用酶標(biāo)儀讀取OD值。
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貯存及穩(wěn)定性
試劑盒應(yīng)當(dāng)在2~8℃運(yùn)輸和儲(chǔ)存，避免高溫和陽光直射，沒有打開的試劑能保存到有效期。包被條在封閉的袋子內(nèi)2~8℃能保存到有效期。準(zhǔn)備好的試劑的儲(chǔ)存及其穩(wěn)定性在相應(yīng)章節(jié)已闡明。
開封的微孔板密封放置2-8℃下可保存至有效期
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樣品采集和貯存
人血清

注意靜脈穿刺采集全血的常規(guī)注意事項(xiàng)。從采集到血液樣品的那一刻起到檢測(cè)時(shí)都應(yīng)保持血液樣品的化學(xué)整體性。不要使用明顯溶血、黃疸的和脂血樣品。如果樣品出現(xiàn)混濁，則在實(shí)驗(yàn)前應(yīng)當(dāng)離心以除去所有的微粒物質(zhì)。此試驗(yàn)要采用人血清樣本
儲(chǔ)存	2-8℃	≤-20℃	避免熱源和太陽直射，避免反復(fù)凍溶。
穩(wěn)定性	5天	12mon

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試劑盒成分

規(guī)格	符號(hào)	成分
1 x 12 x 8	MTP	微孔反應(yīng)板 即用,可分拆.預(yù)包被有重組漢灘型抗原（strain: CG 76-118）
1 x 750 µL	ANTI IgG CONJ CONC	酶聯(lián)物（20倍濃縮） 過氧化酶標(biāo)記抗IgG
1 x 750 µL	ANTI IgM CONJ CONC	酶聯(lián)物（20倍濃縮） 過氧化酶標(biāo)記抗IgM
1 x 1.5 mL	CONTROL + IgG	陽性質(zhì)控IgG 即用.內(nèi)含:人血清,穩(wěn)定劑,防腐劑
1 x 1.5 mL	REFCONTROL IgG	參考對(duì)照質(zhì)控IgG 即用.內(nèi)含:人血清,穩(wěn)定劑,防腐劑
1 x 1.5 mL	CONTROL + IgM	陽性質(zhì)控IgM 即用.內(nèi)含:人血清,穩(wěn)定劑,防腐劑
1 x 15 mL	DILBUF CONC	樣品稀釋緩沖液（20倍濃縮） 紅色瓶蓋.內(nèi)含:PBS，pH7.4，清潔劑和0.01%的硫柳汞
1 x 1.5 mL	REFCONTROL IgM	參考對(duì)照質(zhì)控IgM 即用.內(nèi)含:人血清,穩(wěn)定劑,防腐劑
1 x 1.9 mL	CONTROL-	陰性質(zhì)控 即用.內(nèi)含:人血清,穩(wěn)定劑,防腐劑
1 x 100 mL	WASHBUF CONC	洗滌液（10倍濃縮） 內(nèi)含:PBS緩沖液
1 x 1.5 mL	RE-AB	類風(fēng)濕因子吸附劑 即用.內(nèi)含抗-人IgG, 穩(wěn)定劑,防腐劑
1 x 12 mL	TMB SUBS	TMB底物液 即用.內(nèi)含:TMB
1 x 12 mL	TMB STOP	TMB終止液 即用.內(nèi)含0.5 M 硫酸
1 x	FOIL	膠粘薄膜

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實(shí)驗(yàn)做需器材但試劑盒沒提供
 

• 微移液管  體積（5; 20; 50; 100; 200; 1000 µL）
• 渦旋混合器
• 保溫箱, 37°C
• 試管（用于樣品稀釋）
• 8道微量移液器
• 洗瓶,自動(dòng)或半自動(dòng)洗板機(jī)
• 酶標(biāo)儀
• 雙蒸水或去離子水
• 吸水紙,吸嘴,計(jì)時(shí)器

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實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
實(shí)驗(yàn)前將試劑盒平衡至室溫（18-25°C）.含結(jié)晶的緩沖濃縮液可在37°C下迅速將其溶解.實(shí)驗(yàn)前將其冷卻至至室溫（18-25°C）
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稀釋濃宿成分的準(zhǔn)備（以測(cè)32孔為例）
提示:實(shí)驗(yàn)前取所需量試劑,并迅速用于稀釋.

濃縮液 （示例）	組分	體積	稀釋液	比例	備注	存儲(chǔ)	穩(wěn)定性
3mL	DILBUF CONC	57mL	去離子水	1:20	充分混勻	2-8°C	1周
10 mL	WASHBUF CONC	90 mL	去離子水	1:10	充分混勻	2-8°C	8周
200 µL	ANTI IgG CONJ CONC OR ANTI IgM CONJ CONC	3.8 mL	稀釋洗滌液	1:20	充分混勻	-	實(shí)驗(yàn)結(jié)束后倒掉

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樣品稀釋

	稀釋		比例	備注		穩(wěn)定性
IgG樣品	常規(guī)	稀釋樣品稀釋液	1:201	10 µL+2000 µL	2-8°C	6周
IgM樣品	常規(guī)	稀釋樣品稀釋液	1:201	10 µL+2000 µL （加15 µL類風(fēng)濕因子吸附劑至250 µL稀釋血清樣品, 18-25°C孵育30分鐘）	2-8°C	6周

提示:未稀釋樣品可于-20°C下保持?jǐn)?shù)月
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實(shí)驗(yàn)步驟
1.將100μl即用型陽性質(zhì)控、陰性質(zhì)控、參考對(duì)照質(zhì)控和稀釋血清樣品（如是IgM樣品,需用類風(fēng)濕因子吸附劑前處理）加入到相應(yīng)的微孔中。
2.膠粘薄膜蓋板，37℃下溫育45分鐘。
3.移除膠粘薄膜, 棄除孔內(nèi)反應(yīng)液.每孔加入300μl稀釋洗滌液，重復(fù)洗板4次，在吸水紙上拍干去除殘留液滴。
4.每孔中加入100μl稀釋酶聯(lián)物（IgG 或IgM）
5.膠粘薄膜蓋板。37℃下溫育45分鐘.
6.移除膠粘薄膜, 棄除孔內(nèi)反應(yīng)液.每孔加入300μl稀釋洗滌液，重復(fù)洗板4次，在吸水紙上拍干去除殘留液滴。
7.加底物液和終止液,建議用8道微移液器,保證加液相等的時(shí)間間隔。避免產(chǎn)生氣泡。
8.每孔中加入100μl TMB底物液
9.室溫（18-25°C）溫育10分鐘
10.每孔中加入100μl終止液終止底物液反應(yīng)。
11.20分鐘內(nèi)于酶標(biāo)儀450nm處讀取OD值。（參考波長：650nm）
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8、結(jié)果計(jì)算
用病人樣品的OD值比上參考對(duì)照質(zhì)控的OD值計(jì)算檢驗(yàn)結(jié)果
A_病人樣品/ A_{參考對(duì)照質(zhì)控}= Q
 
 

• IgG抗體：

Q＜1	陰性：沒有檢測(cè)到抗?jié)h灘型漢坦病毒IgG抗體
1≤Q≤1.5	可疑灰色區(qū)域，不能明確說明結(jié)果，10天之后應(yīng)當(dāng)對(duì)疾病的病程進(jìn)行再次檢測(cè)。如果疑似病人感染了漢坦病毒，我們建議您對(duì)檢測(cè)的樣品也檢測(cè)下漢灘病毒（Hantaan）IgM抗體或檢測(cè)下普馬拉（Puumala）病毒抗體。
Q＞1.5	陽性：檢測(cè)到抗?jié)h灘病毒特異性IgG抗體

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IgM抗體：

Q＜1	陰性：沒有檢測(cè)到抗?jié)h灘型漢坦病毒IgM抗體
1≤Q≤2	可疑灰色區(qū)域，不能明確說明結(jié)果，10天之后應(yīng)當(dāng)對(duì)疾病的病程進(jìn)行再次檢測(cè)。如果疑似病人感染了漢灘病毒，我們建議您對(duì)檢測(cè)的樣品也檢測(cè)下普馬拉病毒（Puumala）抗體。
Q＞2	陽性：檢測(cè)到抗?jié)h坦病毒特異性IgM抗體

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本譯文僅供參考，詳情請(qǐng)以原文為準(zhǔn)。
 
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