胎牛血清是在母牛懷孕3-8個月時,通過胎牛心臟穿刺采血獲得新鮮的胎牛全血,經(jīng)自然層析、離心后收集得到去除血細胞、纖維蛋白等成分的淡黃色透明上清液體,并在生產(chǎn)過程使用多級高置流膜過濾技術和三級0.1um終端微濾方法處理而的血清。相比于新生牛和小牛血清,胎牛血清中所含的抗體、補體等對細胞有傷害的成分最少,因此對于一些較“脆弱”的細胞如干細胞、原代細胞,—定要使用優(yōu)質(zhì)的胎牛血清進行培養(yǎng)。胎牛血清的內(nèi)毒素含量多少為宜?
有下列情況者,對血清內(nèi)毒素應格外留意篩選:
1.養(yǎng)干細胞時,干細胞對內(nèi)毒素非常敏感,如果血清中內(nèi)毒素≥3EU/ml時,干細胞很容易死亡。很多使用者,在血清在試用前,就通過提早審核該批次《檢測報告》,以決定是否入圍進行試用。
2.養(yǎng)免疫細胞時,過高的內(nèi)毒素可誘導免疫細胞釋放炎癥因子,抑制小鼠紅細胞集落的形成等。
3.基因敲除相關的細胞實驗,培養(yǎng)的細胞要盡可能保持其原始狀態(tài),任何引導細胞衰老或凋亡的試劑,都會讓后續(xù)的實驗結果“失之毫厘,謬以千里”。在準備血清和其他試劑時,選擇極低的內(nèi)毒素(最好≤1EU/ml),對實驗至關重要;
4.原代培養(yǎng)、雜交瘤融合、細胞轉(zhuǎn)染,或者肝細胞、神經(jīng)細胞、內(nèi)皮等難養(yǎng)細胞的擴增,這些都需要挑選好的血清給細胞以有力支持。因此,挑選更低的內(nèi)毒素,是保證實驗順利的第一步。
5.實驗室有些細胞,需要長期培養(yǎng)、長期凍存,或者經(jīng)常復蘇、經(jīng)常培養(yǎng)的,血清會經(jīng)?;蜷L時間作用于細胞。為保證細胞的健康,都應該選用更低內(nèi)毒素的血清,以避免內(nèi)毒素長久對細胞的毒性影響。
總之,血清中內(nèi)毒素含量過高,更容易導致細胞“亞健康”,造成數(shù)據(jù)不準,或細胞狀態(tài)不良、老化、甚至死亡,導致試驗中斷失敗。血清中的內(nèi)毒素越低越好。
全球細胞培養(yǎng)學會均依據(jù)內(nèi)毒素對血清的品質(zhì)進行分級和命名。
內(nèi)毒素含量越低的血清,級別就越高,以胎牛血清為例:
當血清中內(nèi)毒素含量≤10EU/ml時,此血清為特級胎牛血清;
當血清中內(nèi)毒素含量﹥10EU/ml,≤ 25EU/ml時,此血清為優(yōu)級胎牛血清;
當血清中內(nèi)毒素含量≥ 25EU/ml時,此血清為標準級胎牛血清;
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