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毛細(xì)管區(qū)帶電泳(CZE)為HPCE的基本操作模式，一般采用磷酸鹽或硼酸鹽緩沖液，實(shí)驗(yàn)條件包括緩沖液濃度、pH值、電壓、溫度、改性劑(乙腈、甲醇等)，用于對(duì)帶電物質(zhì)(藥物、蛋白質(zhì)、肽類(lèi)等)分離分析，對(duì)于中性物質(zhì)無(wú)法實(shí)現(xiàn)分離。毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜(MECC)為一種基于膠束增溶和電動(dòng)遷移的新型液體色譜，在緩沖液中加入離子型表面活性劑作為膠束劑，利用溶質(zhì)分子在水相和膠束相分配的差異進(jìn)行分離，拓寬了CZE的應(yīng)用范圍，適合于中性物質(zhì)的分離，亦可區(qū)別手性化合物，可用于氨基酸、肽類(lèi)、小分子物質(zhì)、手性物質(zhì)、藥物樣品及體液樣品的分析。
毛細(xì)管等速電泳(CITP)采用先導(dǎo)電解質(zhì)和后繼電解質(zhì)，構(gòu)成不連續(xù)緩沖體系，基于溶質(zhì)的電泳淌度差異進(jìn)行分離，常用于離子型物質(zhì)(如有機(jī)酸)，并因適用較大內(nèi)徑的毛細(xì)管而可用于微制備，但本法空間分辨率較差。毛細(xì)管等電聚焦電泳(CIEF)用于具兼性離子的樣品(蛋白質(zhì)、肽類(lèi))，等電點(diǎn)僅差0.001可分離的物質(zhì)。毛細(xì)管凝膠電泳(CGE)依據(jù)大分子物質(zhì)的分子量大小進(jìn)行分離，主要用于蛋白質(zhì)、核苷酸片段的分離。此外，還有毛細(xì)管電色譜(CEC)及非水毛細(xì)管電泳(CNACE)，用于水溶性差的物質(zhì)和水中難進(jìn)行反應(yīng)的分析研究。目前CZE和MECC用得較多，本文以這兩種方法為例來(lái)說(shuō)明HPLC的原理。
工作原理：
毛細(xì)管兩端分別浸入緩沖液中，而緩沖液中分別插入連有高壓電源的電極，根據(jù)被分離物之間電荷和體積的不同，帶電荷分子朝相反極性的電極方向移動(dòng)。又利用毛細(xì)管內(nèi)壁上的電荷和應(yīng)用的勢(shì)能而引起的電解質(zhì)移動(dòng)，毛細(xì)管內(nèi)表面帶有硅羥基基團(tuán)，當(dāng)毛細(xì)管內(nèi)充滿(mǎn)緩沖溶液時(shí)，毛細(xì)管壁上的硅羥基發(fā)生解離，生成氫離子溶解在溶液中，這樣就使毛細(xì)管壁上形成雙電層，管壁是負(fù)電荷層，溶液是正電荷層。在毛細(xì)管的兩端加上直流電場(chǎng)后，帶正電的溶液就會(huì)整體向負(fù)極的一端移動(dòng)，形成了電滲流。無(wú)論是帶正電、帶負(fù)電或不帶電的粒子，都在電滲流的作用下，向陰極遷移，帶正電的，受到同方向的電場(chǎng)力作用，遷移快，不帶電的遷移速度次之，帶負(fù)電的遷移速度慢，從而實(shí)現(xiàn)各蛋白組分的分離。
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