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細胞培養(yǎng)技術(shù)簡要總結(jié)

來源:上??撇┤鹕锟萍加邢薰?nbsp;  2023年03月14日 10:07  

 細胞培養(yǎng)泛指所有體外培養(yǎng),其含義是指從動物活體體內(nèi)取出組織,于模擬體內(nèi)生理環(huán)境等特定的體內(nèi)條件下,進行孵育培養(yǎng),使之生存并生長。細胞培養(yǎng)工作現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、新藥研發(fā)等各個領(lǐng)域,成為最重要的基礎(chǔ)科學(xué)之一。

    細胞培養(yǎng)常用培養(yǎng)基來維持細胞生長的所需營養(yǎng),培養(yǎng)基一般分為固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基。液體培養(yǎng)基中加入一定的凝固劑(如瓊脂)或固體培養(yǎng)物(如麩皮、大米等)便成為固體培養(yǎng)基。固體培養(yǎng)基在營養(yǎng)通風的表面可培養(yǎng)單個菌落,在細胞的分離鑒定、技術(shù)等方面起到相當重要的作用。下面來簡單介紹下細胞培養(yǎng)的過程及注意事項。

細胞培養(yǎng)前期準備

1、培養(yǎng)基、血清、胰酶、PBS、培養(yǎng)瓶、滴管、離心管?;?

2、100ml玻璃瓶10個(用于分裝血清,配成10%培養(yǎng)液);25-50ml玻璃瓶2個(裝胰酶);500ml玻璃瓶2個(分裝PBS);?

3、所有玻璃器皿洗凈烘干泡酸再洗凈烘干消毒;塑料或橡膠塞則洗凈烘干蒸餾水煮30min 烘干消毒;

4、酒精燈、鑷子、剪刀、廣口玻璃瓶、消毒用酒精、棉球、吸耳球、酒精噴壺、橡膠手套

細胞培養(yǎng)基本技術(shù) 

1、建立細胞凍存庫,細胞凍存庫應(yīng)該分主細胞庫和工作細胞庫,當需要做實驗時從主細胞庫中復(fù)蘇細胞建立工作細胞庫。每一個凍存標本都應(yīng)明確記錄細胞的性質(zhì)、代數(shù)及有無污染。

2、進行詳細的實驗記錄,包括細胞系的種類及來源、有無污染、細胞代數(shù)和倍增時間、以及選擇性突變。經(jīng)過連續(xù)傳代培養(yǎng)的細胞與它較早代數(shù)的凍存細胞相比,隨著培養(yǎng)時間的延長,細胞在適應(yīng)環(huán)境的過程中,其生物特性已發(fā)生了改變。培養(yǎng)的細胞由若干生長速度及活力各異的亞群組成。隨著培養(yǎng)時間的延長生長速,度快及活力高的細胞亞群逐漸占優(yōu)勢這種選擇性,趨勢會影響整個細胞群的生物特性。應(yīng)用不同代數(shù)的細胞連續(xù)進行實驗則結(jié)果會發(fā)生偏差。建立細胞凍存庫就能避免這種影響通過復(fù)蘇相同代數(shù)的細胞,人們就能在較為均一的條件下重復(fù)實驗。

3、為了避免細胞被外界污染物污染以及操作過程中產(chǎn)生的飛沫限制在超凈工作臺中。超凈工作臺需要合理的布置和維護,工作臺內(nèi)減少物品,使用時采用垂直氣流比水平氣流安全。

4、為了避免細胞發(fā)生污染,在同一個實驗室內(nèi)培養(yǎng)不同的細胞系所使用的培養(yǎng)基應(yīng)分開使用。

   


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