產(chǎn)堿普羅威登斯菌的培養(yǎng)方法與活化步驟！

一、菌種簡介

平臺編號：bio-67866

規(guī)格：凍干物

拉丁屬名：Providencia alcalifaciens

菌株名稱：產(chǎn)堿普羅威登斯菌

其它編號：ATCC 51902

培養(yǎng)基編號：121

培養(yǎng)溫度：37℃

用途：質(zhì)量控制菌株

培養(yǎng)基信息

培養(yǎng)基編號：121

名稱：Tryptic Soy Agar  

備注：胰蛋白棟 17 g 大豆蛋白棟 3 g 葡萄糖 2.5 g NaCl 5.0 g K2HPO4 2.5 g 瓊脂 15 g pH 7.3 +/- 0.2.

用途：質(zhì)量控制菌株

注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用。

二、產(chǎn)堿普羅威登斯菌 收貨須知：收貨當天發(fā)現(xiàn)異常，請在 24 小時內(nèi)及時聯(lián)系客服，逾期視為收貨良好；干粉一次用完不得留存，活化 1~2 代后恢復活力即可使用，斜面、菌液使用詳見附頁。請嚴格按照本說明進行活化，否則造成菌種異常、失活等情形，不予提供補發(fā)服務(wù)。

三、產(chǎn)堿普羅威登斯菌 培養(yǎng)條件：30℃，好氧，營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，24-48h。營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：牛肉膏 3.0g，蛋白胨 10.0g，NaCl 5.0g，瓊脂 20.0g(液體培養(yǎng)基不含)，蒸餾水 1.0L，pH 7.0。121℃，15min 滅菌。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時加入 5mgMnSO4·H2O，則有利于產(chǎn)生芽孢。

四、產(chǎn)堿普羅威登斯菌 活化步驟

①準備 1 支含有 5~10mL 液體培養(yǎng)基的試管和 2 個平板；

②安全柜中打開，用酒精燈灼燒頂部，后迅速滴上無菌水使之破裂， 隨后用鑷子將其敲碎；

③吸取 0.5mL 液體培養(yǎng)基打入凍干管， 充分溶解后重新打回液體試管中，混勻；

④吸取 0.2mL 菌懸液打入平板中，涂布均勻，重復兩次獲得兩個平板；

⑤將液體試管和平板全部置于上述培養(yǎng)條件下培養(yǎng)，菌種長出即可使用。

五、產(chǎn)堿普羅威登斯菌 培養(yǎng)方法

1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種（一級種）、原種（二級種）和栽培種（三級種）三級。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復篩。

2、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱種子制備，是指菌種在一定條件下，經(jīng)過擴大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進一步擴大菌體量及合成產(chǎn)物之用。

3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備 菌種制備。

4、保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種，用無菌手續(xù)挑取少許，接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上，在25℃（或較高溫度）下培養(yǎng)5～7天（或較長時間。所得孢子還需進一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子（對于霉菌類孢子制備，多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基）。

5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上，于25～28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。

6、如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子，如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的，則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿），及無機鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯，無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。

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