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純水及超純水機在細(xì)胞培養(yǎng)中的應(yīng)用

來源:普邁精醫(yī)科技(北京)有限公司   2022年11月01日 14:54  

       水是細(xì)胞賴以生存的主要環(huán)境,營養(yǎng)物質(zhì)和代謝產(chǎn)物都必須溶解在水中,才能為細(xì)胞吸收和排泄。對于體外培養(yǎng)的細(xì)胞來說,水是所有細(xì)胞培養(yǎng)用液和試劑中較簡單、但也是最重要的組分。細(xì)胞培養(yǎng)對水的質(zhì)量要求較高,培養(yǎng)用水中如果含有一些雜質(zhì),即使含量極微,有時候也會影響細(xì)胞的存活和生長,甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡。



水中的雜質(zhì)對水質(zhì)有不同影響:

  • 離子,平衡滲透壓;

  • 微生物,污染,改變微壞境如pH,影響增殖,死后釋放內(nèi)毒素等;

  • 內(nèi)毒素,改變細(xì)胞外形、活化細(xì)胞、促進或抑制細(xì)胞分裂、影響細(xì)胞附著等;

  • 有機物,水中有機物所含碳的總量可間接反映出水中細(xì)菌和內(nèi)毒素的含量,應(yīng)控制在合理范圍內(nèi),以免影響細(xì)胞培養(yǎng)。

水質(zhì)評價常用的指標(biāo):


    • 電阻率(electrical resistivity),衡量實驗室用水導(dǎo)電性能的指標(biāo),單位為MΩ·cm,隨著水內(nèi)無機離子的減少電阻數(shù)值逐漸變大;

    • 異體菌落數(shù)(heterotrophic bacteriacount,HBC),衡量實驗室用水微生物的指標(biāo),單位為cfu/ml

    • 有機物(total organic carbon,TOC),水中碳的濃度,反映水中可氧化的有機化合物的含量,單位為μg/L或ppd;

    • 內(nèi)毒素(endotoxin),革蘭氏陰性菌的脂多糖細(xì)胞壁碎片,又稱為“熱原”,單位EU/ml。

參考國際標(biāo)準(zhǔn)化組織的實驗室純水規(guī)范ISo3696,美國臨床試驗室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(Clinical and Laboratory Standards Institute)及美國試驗和材料學(xué)會(American Society for Testing and Materials)D1193的試劑純水規(guī)范,我國GBT6682和GBT30301的實驗用水指導(dǎo),結(jié)合實際的實驗操作經(jīng)驗??偨Y(jié)細(xì)胞培養(yǎng)的水質(zhì)要求

  • 一定要無菌,HBC<0.1cfu/ml;

  • 無蛋白及核酸酶和內(nèi)黑素;

  • 無內(nèi)毒素或無熱源,<0.001EU/ml;

  • TOC<3ppd,一些重金屬(鎘)毒害大,即便是很低劑量(<0.1ppd)也有影響;

  • 電阻率≥18MΩ.cm

細(xì)胞培養(yǎng)以及各種培養(yǎng)液和試劑的配置用水均需要經(jīng)過嚴(yán)格的純化處理;即使是玻璃器皿,在用自來水清洗過后也應(yīng)至少用超純水漂洗三次以上。
目前,市場上供應(yīng)的純水裝置種類較多, 比如自來水進水同時制備二級純水和超純水的一體化純水裝置,可以由自來水進水通過預(yù)處理柱、反滲透柱及電去離子(EDI)模塊等純化后達到二級純化水,儲存于水箱中以滿足日常的清洗;水箱中的水再經(jīng)過超純化柱去離子,紫外燈照射殺菌和降低有機物,最后經(jīng)終端除內(nèi)毒素濾器達到無菌無熱源的超純水。




純水的儲存對保持水的質(zhì)量也是至關(guān)重要的,由于周圍環(huán)境和空氣中的二氧化碳更容易使水污染改變其pH,所以儲存水的容器要盡量密封,避免和外界過多接觸,抑制微生物生長。EVOQUA的Ultra Clear系列超純水機水箱中內(nèi)置紫外燈和二氧化碳吸附濾器長期保證水箱中純水的水質(zhì)。


對于超純水而言尤其需要格外注意終端水質(zhì)的TOC、電阻率、細(xì)菌和內(nèi)毒素的含量,必須做到即取即用。因此取水水質(zhì)實時監(jiān)測顯得尤為重要。EVOQUA的Ultra Clear系列超純水機擁有7" 彩色觸摸顯示屏,可以顯示各階段水質(zhì)等重要參數(shù)和耗材更換倒計時,操作簡單直觀。UV燈、TOC監(jiān)測和UF超濾模塊保證了優(yōu)秀的水質(zhì)。這些裝置可有效去除 RNase、DNase 和DNA 等污染物。并可使內(nèi)毒素水平低于 0.001EU/ml。


EVOQUA 懿華,Ultra Clear TP ED 20 TWF EDI 30 UV UF TM 超純水機


注意事項

  1. 超純水應(yīng)當(dāng)注意使用時間,最好即取即用。防止超純水吸取外界的雜質(zhì)導(dǎo)致水質(zhì)下降。

  2. 在合適的環(huán)境使用超純水。環(huán)境中的揮發(fā)性有機物、細(xì)菌等都會影響細(xì)胞培養(yǎng)。

  3. 培養(yǎng)細(xì)胞的容器應(yīng)當(dāng)潔凈無污染。



 


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