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流式細(xì)胞儀的調(diào)試和校準(zhǔn)是怎么進(jìn)行的
流式細(xì)胞儀的調(diào)試和校準(zhǔn)是怎么進(jìn)行的
光譜流式細(xì)胞術(shù)是一種基于常規(guī)流式細(xì)胞術(shù)的技術(shù)，其中光譜儀和多通道檢測(cè)器代替了常規(guī)系統(tǒng)中的傳統(tǒng)反射鏡，濾光器和光電倍增管。流式細(xì)胞儀可以快速進(jìn)行多參數(shù)收集并分析單個(gè)細(xì)胞或顆粒上的數(shù)據(jù)。
流式細(xì)胞儀可以快速測(cè)量、存貯、顯示懸浮在液體中的分散細(xì)胞的一系列重要的生物物理、生物化學(xué)方面的特征參量，并可以根據(jù)預(yù)選的參量范圍把細(xì)胞亞群從中分選出來(lái)。儀器采用激光作為激發(fā)光源，保證其具有更好的單色性與激發(fā)效率;利用熒光染料與單克隆抗體技術(shù)結(jié)合的標(biāo)記技術(shù)，保證檢測(cè)的靈敏度和特異性;用計(jì)算機(jī)系統(tǒng)對(duì)流動(dòng)的單細(xì)胞懸液中單個(gè)細(xì)胞的多個(gè)參數(shù)信號(hào)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理分析，保證了檢測(cè)速度與統(tǒng)計(jì)分析精確性。
流式細(xì)胞儀的調(diào)試和校準(zhǔn)是怎么進(jìn)行的：
在使用前，甚至在使用過(guò)程中都要精心進(jìn)行調(diào)試，以保證工作的可靠性和佳性。調(diào)試的項(xiàng)目主要是激光強(qiáng)度、液流速度和測(cè)量區(qū)的光路等。
激光強(qiáng)度:除調(diào)整反射鏡的角度以調(diào)整到所需波長(zhǎng)的激光出光外，還要結(jié)合顯示屏上的光譜曲線使激光的強(qiáng)度輸出為大。
液流速度:可通過(guò)操作臺(tái)數(shù)字顯示監(jiān)督，調(diào)節(jié)氣體壓力大小以獲得穩(wěn)定的液流速度。
測(cè)量區(qū)光路調(diào)節(jié):這是調(diào)試工作的關(guān)鍵。需要保證在測(cè)量區(qū)的液流、激光束、90散射測(cè)量光電系統(tǒng)垂直正交，而且交點(diǎn)較小。一般可在用標(biāo)準(zhǔn)熒光微球等校準(zhǔn)中完成。
流式細(xì)胞術(shù)中所測(cè)得的量是相對(duì)值，因此需要在使用前或使用中對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行校準(zhǔn)或標(biāo)定，這樣才能通過(guò)相對(duì)測(cè)量獲得的意義。因而FCM中的校準(zhǔn)具有雙重功能:儀器的準(zhǔn)直調(diào)整和定量標(biāo)度。標(biāo)準(zhǔn)樣品應(yīng)該穩(wěn)定，有形成份形狀應(yīng)是大小比較一致球形，樣品分散性能良好，且經(jīng)濟(jì)、容易獲得。
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