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細(xì)數(shù)流式細(xì)胞儀驗(yàn)證的基本流程

來(lái)源:華譜(上海)檢測(cè)技術(shù)有限公司   2022年05月10日 14:43  

細(xì)數(shù)流式細(xì)胞儀驗(yàn)證的基本流程

1.流式細(xì)胞儀介紹

流式細(xì)胞儀(Flowcytometry)是對(duì)于處在快速直線流動(dòng)狀態(tài)中的細(xì)胞或生物顆粒同時(shí)利用檢測(cè)器進(jìn)行多參數(shù)、快速的自動(dòng)分析和分選的裝置。它可以快速測(cè)量、存貯、顯示懸浮在液體中的分散細(xì)胞的一系列重要的生物物理、生物化學(xué)方面的特征參量,并可以根據(jù)預(yù)選的參量范圍的細(xì)胞亞群從中分選出來(lái)。 但流式細(xì)胞儀的細(xì)節(jié)分辨率為零,即它只能測(cè)量一種細(xì)胞的總核酸量,總蛋白量等指標(biāo),而不能鑒別和測(cè)出某一特定部位的核酸或蛋白的具體數(shù)目。流式細(xì)胞儀主要由液流系統(tǒng)、光學(xué)系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)、分析系統(tǒng)四部分組成。目前已廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、基礎(chǔ)科學(xué)研究、細(xì)胞遺傳學(xué)、生物化學(xué)等研究的各個(gè)領(lǐng)域。


2.流式細(xì)胞儀的原理

流式細(xì)胞儀的工作原理為:將經(jīng)特異性熒光染料染色后的待測(cè)細(xì)胞放入樣品管中,細(xì)胞在氣體的壓力下進(jìn)入充滿鞘液的流動(dòng)室,然后鞘液和樣品流在噴嘴附近組成一個(gè)圓柱流束,與水平方向的激光束垂直相交,染色的細(xì)胞受激光照射后發(fā)出熒光或產(chǎn)生散射光,這些信號(hào)分別被光電倍增管熒光檢測(cè)器和光電二極管散射光檢測(cè)器接收,轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)后,經(jīng)過(guò)計(jì)算機(jī)儲(chǔ)存、計(jì)算、分析這些數(shù)字化信息,就可得到細(xì)胞的大小、活性、核酸含量、酶和抗原的性質(zhì)等物理和生化指標(biāo)。

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3.相關(guān)術(shù)語(yǔ)

設(shè)門:劃定某一區(qū)域的細(xì)胞群體,對(duì)其單獨(dú)加以分析或分選。

調(diào)補(bǔ)償:若兩種以上的熒光素的發(fā)射光譜之間存在重疊,則需要調(diào)補(bǔ)償。

MFI值:即為平均熒光強(qiáng)度。


4.為什么流式細(xì)胞儀要做驗(yàn)證呢?

流式細(xì)胞儀是對(duì)細(xì)胞或生物顆粒物理、化學(xué)等相關(guān)參數(shù)的自動(dòng)分析和分選的裝置,對(duì)流式細(xì)胞儀進(jìn)行驗(yàn)證就是保證分析檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠,所以必須對(duì)所用到的組成系統(tǒng)各部分進(jìn)行驗(yàn)證,以證明該系統(tǒng)符合檢測(cè)的目的和要求,這就是儀器驗(yàn)證。本質(zhì)上講,儀器驗(yàn)證就是根據(jù)檢測(cè)物質(zhì)的要求,預(yù)先對(duì)儀器設(shè)置一定的參數(shù)范圍及合適的檢測(cè)器,并通過(guò)設(shè)計(jì)合理的試驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證該儀器是否符合檢測(cè)項(xiàng)目的要求。這些驗(yàn)證項(xiàng)目如分辨力、線性相關(guān)系數(shù)、重復(fù)性、示值誤差等某一個(gè)產(chǎn)生誤差,其他的都會(huì)有一定的偏移,致使結(jié)果改變。儀器驗(yàn)證就是保證整個(gè)試驗(yàn)是否能成功的先決條件,只有經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的儀器,確保該儀器各部分都在良好的情況下才能用于細(xì)胞相關(guān)參數(shù)的分析、分選,使檢測(cè)結(jié)果得到保證,使誤差降低到最小。


5.流式細(xì)胞儀的驗(yàn)證項(xiàng)目

(1)  安裝確認(rèn)

a.  文件確認(rèn)

b.  附件確認(rèn)

c.  安裝環(huán)境確認(rèn)

d. 安裝情況確認(rèn)

(2)  運(yùn)行功能確認(rèn)

a.  運(yùn)行功能確認(rèn)

b.  軟件控制功能測(cè)試

(3) 性能確認(rèn)

a.  分辨力測(cè)試

b.   線性相關(guān)系數(shù)測(cè)試

c.  檢出限測(cè)試

d.  漂移測(cè)試

e.  重復(fù)性測(cè)試

f.  示值誤差測(cè)試


6.流式細(xì)胞儀的操作步驟

(1)  檢測(cè)鞘液桶和廢液桶的狀態(tài)是否滿足本次使用,蓋緊黑蓋;

(2)  檢測(cè)穩(wěn)壓電源,打開(kāi)電源,對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行預(yù)熱5-10分鐘;

(3)  打開(kāi)氣體閾,調(diào)節(jié)壓力,獲得適宜的液流速度,應(yīng)排除管路中氣泡;開(kāi)啟光源冷卻系統(tǒng);

(4)  在樣品管中加入去離子水,沖洗液流的噴嘴系統(tǒng);

(5)  利用校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)樣品,調(diào)整儀器,使在激光功率、光電倍增管電壓、放大器電路增益調(diào)定的基礎(chǔ)上,0和90散射的熒光強(qiáng)度*,并要求變異系數(shù)為最??;

(6)  選定流速、測(cè)量細(xì)胞數(shù)、測(cè)量參數(shù)等,在同樣的工作條件下測(cè)量樣品和對(duì)照樣品;同時(shí)選擇計(jì)算機(jī)屏上數(shù)據(jù)的顯示方式,從而能直觀掌握測(cè)量進(jìn)程;

(7)  樣品測(cè)量完畢后,再用去離子水沖洗液流系統(tǒng);

(8)  因?yàn)閷?shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)已存入計(jì)算機(jī)硬盤(有的機(jī)器還備有光盤系統(tǒng),存貯量更大),因此可關(guān)閉氣體、測(cè)量裝置,而單獨(dú)使用計(jì)算機(jī)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理;

(9)  最后將所需結(jié)果打印出來(lái),操作完畢,關(guān)機(jī)。


7.注意事項(xiàng)

a.   光電倍增管要求穩(wěn)定的工作條件,所有需放置在避光的環(huán)境下;另外還要注意磁屏蔽;

b.   光源不得在短時(shí)間內(nèi)(一般要1h左右)關(guān)上又打開(kāi);使用光源必須預(yù)熱并注意冷卻系統(tǒng)工作是否正常

c.   液流系統(tǒng)必需隨時(shí)保持液流暢通,避免氣泡堵塞;

d.   鞘流液使用前要經(jīng)過(guò)過(guò)濾、消毒,必須符合使用要求;

e.   不同的檢測(cè)對(duì)象選用對(duì)應(yīng)的濾片系統(tǒng)、放大器的類型等;

f.   特別注意的是每次檢測(cè)都需要空白對(duì)照組,做對(duì)照試驗(yàn);

g.   調(diào)節(jié)電壓時(shí),如果檢測(cè)的目標(biāo)細(xì)胞體積較小,可以適當(dāng)提高電壓值。

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公司背景介紹:

華譜.澤恒是專注于為生物制藥行業(yè)提供實(shí)驗(yàn)室儀器計(jì)量校準(zhǔn)、GMP驗(yàn)證服務(wù)/3Q驗(yàn)證/設(shè)備確認(rèn)/廠房驗(yàn)證的專業(yè)服務(wù)商。我們給制藥客戶解決的是一站式QC/QA/工程/驗(yàn)證等事業(yè)部的質(zhì)控外包服務(wù)。

我們活躍于許多關(guān)鍵市場(chǎng)領(lǐng)域,從細(xì)胞/基因治療領(lǐng)域、抗體藥方向、干細(xì)胞治療到疫苗生產(chǎn)等生物制藥領(lǐng)域,一直以來(lái)都是圍繞生物醫(yī)藥客戶實(shí)現(xiàn)讓讓制藥體系更安全"為使命,提高服務(wù)的效率、降低行業(yè)的成本、踐行好的客戶服務(wù)體驗(yàn)。自主品牌:華譜(上海)檢測(cè)技術(shù)有限公司、澤恒計(jì)量檢測(cè)(北京)有限公司。





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