手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號(hào)：chem17
掃碼關(guān)注視頻號(hào)
人胚腎細(xì)胞293T培養(yǎng)步驟主要如下
人胚腎細(xì)胞293T是293細(xì)胞株插入SV40T-抗原的溫度敏感基因后產(chǎn)生的高轉(zhuǎn)染效率的衍生細(xì)胞株。人胚腎細(xì)胞；293，上皮狀，早期報(bào)道中指出該細(xì)胞基因組中含有腺病毒5（Ad5）基因組的左側(cè)端和右側(cè)端的DNA，但是明確了只存在其左側(cè)端的DNA。經(jīng)過對(duì)Ad5的插入點(diǎn)的克隆測序發(fā)現(xiàn)，Ad5的1～4344位線性核苷酸整合入細(xì)胞染色體19q13.2。該細(xì)胞為人類腺病毒載體擴(kuò)增的宿主?？杀磉_(dá)異常的玻連蛋白的細(xì)胞表面受體，由整合素β1亞單位和玻連蛋白受體α-v亞單位組成。生物安全級(jí)別為2級(jí)。
人胚腎細(xì)胞293T培養(yǎng)步驟主要如下：
1、培養(yǎng)皿/瓶用槍頭或移液管吸去原培養(yǎng)液；
2、無菌PBS或無菌生理鹽水洗滌3次（按培養(yǎng)體積加入）；
3、加入適量胰酶消化適當(dāng)時(shí)間（一般胰酶為0.25%；9cm/10cm培養(yǎng)皿和25cm培養(yǎng)瓶，一次加入1mL胰酶。消化時(shí)間視細(xì)胞類型等多種情況綜合考慮，一般如果是細(xì)胞株，非原代培養(yǎng)，消化1－2分鐘足矣）；
4、用槍頭吹打數(shù)十次（視細(xì)胞類型而定。一般細(xì)胞株30－50次吧，耗時(shí)一般2分鐘左右）；
5、加入適量體積*培養(yǎng)基終止胰酶消化（如果是9cm/10cm培養(yǎng)皿和25cm培養(yǎng)瓶，可以加入1mL*培養(yǎng)基；現(xiàn)在培養(yǎng)瓶（皿）里有2mL溶液）。
6、現(xiàn)在可以將溶液進(jìn)行分瓶（2mL）。如果是細(xì)胞株，直接均分到兩個(gè)培養(yǎng)瓶（皿）里。如果是原代培養(yǎng)，可以根據(jù)消化時(shí)間來對(duì)細(xì)胞進(jìn)行分離；因此可以將溶液（2mL）都轉(zhuǎn)入新的培養(yǎng)瓶（皿）。
7、將兩個(gè)培養(yǎng)瓶（皿）補(bǔ)足*培養(yǎng)基到正常體積（果是9cm/10cm培養(yǎng)皿和25cm培養(yǎng)瓶，為5mL*培養(yǎng)液）
8、鏡下觀察。剛剛傳代細(xì)胞還沒貼壁，懸浮在溶液中，呈圓形。一般2h之內(nèi)會(huì)貼壁，如果已經(jīng)貼壁，根據(jù)細(xì)胞類型有不同的形態(tài)，但通常都不是圓形。
9、鏡下觀察無誤之后，再放入細(xì)胞培養(yǎng)箱。培養(yǎng)瓶（皿）放入之前，可以用消毒酒精先擦一下。
10、人胚腎細(xì)胞293T傳代之后，第二天細(xì)胞換液一次。當(dāng)然，也可以視情況而定。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí)，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購中心