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正確及時(shí)的沖洗色譜柱？
開(kāi)始試驗(yàn)前,應(yīng)了解柱中當(dāng)前是何種溶劑。對(duì)于新色譜柱,如無(wú)特殊說(shuō)明均為評(píng)價(jià)報(bào)告中所用流動(dòng)相。柱中當(dāng)前溶劑一定要與分析樣品所用流動(dòng)相互溶,如不能混溶,要用與二者均能相互混溶的第三種溶劑過(guò)渡。異丙醇是能與各種溶劑混溶的試劑,可作為中介流動(dòng)相使用。反相鍵合硅膠柱適宜的保存環(huán)境是純甲醇,如分析用流動(dòng)相為緩沖液2有機(jī)溶劑,可先用較低甲醇含量(<20%)的甲醇2水置換掉原來(lái)的純甲醇,再進(jìn)分析用流動(dòng)相，以防止在柱內(nèi)發(fā)生鹽的沉淀；試驗(yàn)結(jié)束后,要及時(shí)用適當(dāng)?shù)娜軇_洗系統(tǒng)并終過(guò)渡到純甲醇沖洗,對(duì)于含有緩沖鹽的流動(dòng)相，辦法是先用與分析用流動(dòng)相組成*相同但不含緩沖鹽的溶液進(jìn)行沖洗，再逐步過(guò)渡到純甲醇沖洗。多數(shù)報(bào)道沖洗液體積大約為柱容積的15～20倍,但終要以基線是否平直、壓力是否穩(wěn)定決定。有些廠家的色譜柱標(biāo)明了流動(dòng)相中有機(jī)相的較低使用濃度為≥5%,使用時(shí)應(yīng)給予注意。
注意溫度和酸堿度
一般以硅膠為基質(zhì)的色譜柱使用溫度不超過(guò)60℃，以低于40℃為宜，特別是在流動(dòng)相pH接近使用限度時(shí)，更應(yīng)降低使用溫度。溫度過(guò)高會(huì)加快鍵合相的水解和硅膠的溶解，從而，使填料性質(zhì)改變，柱床塌陷，降低柱效，改變峰形。目前的鍵合硅膠色譜柱標(biāo)示的pH適用范圍可達(dá)2～10,但在實(shí)際使用時(shí)應(yīng)避免pH條件,特別是在偏堿性的條件(pH≥8)下使用,如必須要在不正常的pH條件下使用時(shí),可通過(guò)以下方法避免柱損害：
(1)在泵和進(jìn)樣閥之間加裝預(yù)柱(飽和柱)來(lái)飽和流動(dòng)相；
(2)降低使用溫度；
(3)檢驗(yàn)完畢后立即用與所使用的流動(dòng)相互相混溶的“溫和溶劑”*清洗；
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