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微量BCA蛋白定量試劑盒說明書

來源:上海研謹(jǐn)生物科技有限公司   2020年09月23日 09:30  

 

 

     微量BCA蛋白定量試劑盒說明書

MicroBCAProteinAssayKit                                                            

微量BCA蛋白定量試劑盒

 

Cat.No.  K2011                       

保存:BSA 標(biāo)準(zhǔn)品:2-8℃

其 它 組分:室溫

組分說明



 

Catalogno.                       K2011

Volume                            120ml

MicroBCAReagentA (MA)               120ml

MicroBCAReagentB (MB)               120ml

MicroBCAReagentC (MC)                6ml

BSA (2mg/ml)                             2ml

 

產(chǎn)品簡介

 

      BCA 蛋白定量法是目前廣泛使用的蛋白定量方法之一。本產(chǎn)品是基于 BCA(BicinchoninicAcid)法研制而成,實現(xiàn)了對蛋白質(zhì)進(jìn)行快速、穩(wěn)定、靈敏的濃度測定。其原理是在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)分子中的肽鏈結(jié)構(gòu)能與 Cu2+絡(luò)合生成絡(luò)合物,同時將 Cu 2+ 還原成 Cu +BCA 試劑可敏感特異地與Cu+結(jié)合,形成穩(wěn)定的有顏色的復(fù)合物。在562nm 處有高的光吸收值,顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比,可根據(jù)吸收值的大小來測定蛋白質(zhì)的含量。本試劑盒專為低蛋白濃度樣品的蛋白定量而設(shè)計,可精*&確測定濃度為 2.5-200 μg/ml 的蛋白溶液,試劑盒的靈敏性高,平行性好,不同種蛋白之間的測量差異極低。本試劑同多種非離子型去污劑有較好的相容性。

 

注意事項 

 

 1.  BSA 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋液需與待測樣品的稀釋液一致(可用 1×PBS 或 0.9%生理鹽水進(jìn)行稀釋)。

 

 2.  操作中請佩戴手套。

 

 3.  本產(chǎn)品僅限科研使用。

 

 操作步驟

 

 1.  稀釋 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品:用與待測蛋白樣品相一致的稀釋液按下表稀釋 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品。

 

 

管號     稀釋液用量(μl)   標(biāo)準(zhǔn)品用量(μl)   終濃度(μg/ml)

 

A               360                40                    200

B               400         100(從A管中?。?                40

C               250         250(從B管中?。?                20

                                                      (從    管中?。?/span>

D               250         250    C                   10

E               250         250(從D管中取)                  5

 

F               250         250(從E管中?。?                2.5

 

G               250                0                  0(空白)

 

 

 2.  配制 MicroBCA 測試工作液:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的數(shù)量配制測試液。

 

試劑 MD 配制:4volumeMC+100volumeMB

 

測試工作液 WR 配制: 1volumeMA+1volumeMD

 

充分混勻后待用

 

 3.  試管及微板檢測(蛋白濃度檢測范圍:2.5-200 μg/ml)

 

    1)按上表準(zhǔn)備好標(biāo)準(zhǔn)品及待測樣品。

 

    2)將蛋白樣品和測試工作液 WR 按照 1:1(體積比)比例加入,充分混勻。在 60 度孵育 60 分鐘。

 

    3)孵育完成后冷卻到室溫,在 562nm 處讀取吸光度值。

 

    4)標(biāo)準(zhǔn)品與待測樣品的吸光度值要扣除空白對照的吸光度值,然后進(jìn)行濃度的計算。

 

    5)如果所得到的蛋白濃度不在檢測范圍內(nèi),請重新稀釋樣品后再次測定。

 

 

附表

                             附表 1. 干擾物質(zhì)表

                                                        

化合物              耐受濃度               化合物              耐受濃度

 

                  緩沖液                             去垢劑和變性劑

 

乙酸鹽                0.2M              Brij35             1%

甘氨酸                 1M              CHAPS               1%

 

HEPES              0.1M             鹽酸胍                 4M

 

MES              50mM              NP-40                  1%

 

MOPS              50mM              辛葡糖                 1%

 

Na+-檸檬酸             <1mM               SDS                1%

 

PIPES             50mM            Triton X-100              1%

 

磷酸鈉                0.1M              糖類

 

乙酸鈉             0.2M pH 5.5         葡萄糖               10mM

TES              50mM                    蔗糖                 1M

 

Tris             0.1M                      螯合劑

 

鹽類               EDTA                      10mM        還原劑

硫酸銨                                                     干擾

 

NaCl               1M            β-巰基乙醇               50μM

 

尿素                 3M               DTT               1mM

 

極性化合物                                  其他

 

DMSO                5%               脂類                干擾

 

甘油                10%            HCl/NaOH             0.1M

 

 

實驗代做服務(wù):

 

WB代做

HE染色

免疫熒光染色

蛋白相互作用分析

ELISA免費(fèi)代檢測

免疫組化

熒光定量PCR

番紅O固綠染色

流式細(xì)胞檢測

激光共聚焦

透射電鏡服務(wù)

DNA甲基化實驗

免疫共沉淀(Co-IP)

DNA甲基化

掃描電鏡實驗

microRNA 測序

半定量RT-PCR

分子克隆和質(zhì)粒載體構(gòu)建服務(wù)

原位雜交(FIsh)

石蠟/冰凍切片

RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀(RIP

CCK8檢測

蛋白雙向(2-D)電泳

蛋白雙向2D-WB

ATP/ADP檢測

Taqman探針

細(xì)胞劃痕

基因組DNA提取

 

 

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