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關(guān)于細胞培養(yǎng)你了解多少呢?

來源:紅榮微再(上海)生物工程技術(shù)有限公司   2020年08月26日 15:52  

  細胞常規(guī)培養(yǎng)是在細胞房中進行,在超凈工作臺或生物安全柜中,把細胞處理好,根據(jù)需要加入細胞培養(yǎng)基,放入細胞培養(yǎng)瓶/皿或細胞培養(yǎng)板中,再放到帶有5% CO2 的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

 細胞培養(yǎng)4要素
     1.類型:懸浮細胞/貼壁細胞
     2.培養(yǎng)基:(無)血清/Buffer/抗生素/無菌過濾
     3.培養(yǎng)環(huán)境:CO2濃度/O2濃度
     4.培養(yǎng)耗材:處理&未處理表面/特殊包被

 流程:

 1. 剪切組織 先將所取得的組織清洗剪切至糊狀,靜置片刻后,用吸管吸去上層液體,加入適當?shù)木彌_液再清洗一次。

 2. 消化分離 消化分離的目的是將細小的組織塊消化分離成細胞團或分散的單個細胞,以利于進一步的培養(yǎng),常用的消化酶有胰蛋白酶和膠原酶。

 3. 培養(yǎng) 細胞懸液用計數(shù)板進行細胞計數(shù)。用培養(yǎng)液將細胞數(shù)調(diào)整為實驗所需密度,分裝于培養(yǎng)皿/培養(yǎng)板/培養(yǎng)瓶中。置CO2培養(yǎng)箱內(nèi),5%CO2,37℃靜置培養(yǎng)。一般3~5d,原代培養(yǎng)細胞可以黏附于瓶壁,并伸展開始生長,可補加原培養(yǎng)液量1/2的新培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)2~3d后換液,一般7~14d可以長滿瓶壁,進行傳代。

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