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發(fā)光劑及原理
化學(xué)發(fā)光是某種物質(zhì)分子吸收化學(xué)能而產(chǎn)生的光輻射。任何一個化學(xué)發(fā)光反應(yīng)都包括兩個關(guān)鍵步驟，即化學(xué)激發(fā)和發(fā)光。因此，一個化學(xué)反應(yīng)要成為發(fā)光反應(yīng)，必須滿足兩個條件：一：反應(yīng)必須提供足夠的能量(170～300KJ/mol)，二，這些化學(xué)能必須能被某種物質(zhì)分子吸收而產(chǎn)生電子激發(fā)態(tài)，并且有足夠的熒光量子產(chǎn)率。到目前為止，所研究的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)大多為氧化還原反應(yīng)，且多為液相化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。
化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的發(fā)光效率是指發(fā)光劑在反應(yīng)中的發(fā)光分于數(shù)與參加反應(yīng)的分子數(shù)之比。對于一般化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，值約為10-6，較典型的發(fā)光劑，如魯米諾，發(fā)光效率可達(dá)0.01，發(fā)光效率大于0.01的發(fā)光反應(yīng)極少見?，F(xiàn)將幾種發(fā)光效率較高的常用的發(fā)光劑及其發(fā)光機(jī)理歸納如下。
魯米諾及其衍生物
魯米諾的衍生物主要有異魯米諾、4—氨基已基—N—乙基異魯諾及AHEI和ABEI等。魯米諾在堿性條件下可被一些氧化劑氧化，發(fā)生化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，輻射出大發(fā)射波長為425nm的化學(xué)發(fā)光。
在通常情況下魯米諾與過氧化氫的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)相當(dāng)緩慢，但當(dāng)有某些催化劑存在時反應(yīng)非常迅速。常用催化劑是金屬離子，在很大濃度范圍內(nèi)，金屬離子濃度與發(fā)光強(qiáng)度成正比，從而可進(jìn)行某些金屬離子的化學(xué)發(fā)光分析，利用這一反應(yīng)可以分析那些含有金屬離子的有機(jī)化合物，達(dá)到很高的靈敏度。其次是利用有機(jī)化合物對魯米諾化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的抑制作用，測定對化學(xué)發(fā)光反應(yīng)具有猝滅作用的有機(jī)化合物。其三是通過偶合反應(yīng)間接測定無機(jī)或有機(jī)化合物。其四是將魯米諾的衍生物如異魯米諾(ABEI)標(biāo)記到羧酸和氨類化合物上，經(jīng)過液相色譜或液相色譜分離后，再在堿性條件下與過氧化氫反應(yīng)進(jìn)行化學(xué)發(fā)光檢測。也可以采用其它分離方法，如將新合成的化學(xué)發(fā)光試劑異硫氰酸異魯米諾標(biāo)記到酵母RNA后，通過離心和透析分離，然后進(jìn)行化學(xué)發(fā)光檢測。此外應(yīng)用的還有N2(B2羧基丙?；?異魯米諾，并對其性能進(jìn)行了研究。
光澤精
光澤精以硝酸鹽的形式存在，在堿性介質(zhì)中，過氧化氫將其氧化成四元環(huán)過氧化物中間體，而后裂解生成激發(fā)態(tài)的吡啶酮而發(fā)光。利用光澤精與還原劑作用，可用于測定臨床醫(yī)學(xué)上一些重要的還原性物質(zhì)，如抗壞血酸、肌酸酐、谷胱甘肽、葡萄糖醛酸、乳糖、葡萄糖。
洛粉堿
洛粉是文獻(xiàn)上記載早的化學(xué)發(fā)光試劑，但卻遲遲未得到應(yīng)用，直到1979年Marino等人將它應(yīng)用于Co的測定后才得到重視。此試劑已被用于多種元素的分析測定。
過氧化草酸酯類
草酸鹽類化學(xué)發(fā)光反應(yīng)大都生成過氧草酰中間體，因此這類反應(yīng)亦稱過氧草酰類化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。過氧草酸鹽類化學(xué)發(fā)光分析應(yīng)用的推廣還有賴于新的熒光衍生試劑的開發(fā)。
吖啶酯類
McCapr等合成了一系列吖啶酯類化合物，對該類試劑的化學(xué)發(fā)光機(jī)理研究表明，發(fā)光效率與試劑中的可解離酸性基團(tuán)的pKa有密切關(guān)系，pKa一般應(yīng)小于11。吖啶酯類化合物是一類很有前途的非放射性核酸探針標(biāo)記物，用作DNA的發(fā)光探針，發(fā)光量子產(chǎn)率高，穩(wěn)定性好，標(biāo)記物對雜交反應(yīng)的動力學(xué)和雜交體的穩(wěn)定性無影響，可以直接在堿性介質(zhì)中進(jìn)行化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。
以上五種化學(xué)發(fā)光劑化學(xué)發(fā)光量子產(chǎn)率高，水溶液穩(wěn)定，能被多種氧化劑直接氧化而發(fā)光，也可被眾多的金屬高于催化發(fā)光反應(yīng)而發(fā)光，許多無機(jī)、有機(jī)和生化組分也能增強(qiáng)或抑制其發(fā)光，因此應(yīng)用十分廣泛。目前報(bào)道的有鄰菲咯啉，堿基水楊酸、羅明丹—B、沒食子酸、香豆素、皮素，茜素紫、蘇木色精，培花青，三苯甲烷類染料，丙酮、乙醇、羥胺等。這些試劑商品化程度高，價廉，使用方便，但化學(xué)發(fā)光量子產(chǎn)率較低，因此，研究增敏試劑來提高它們的化學(xué)發(fā)光量子產(chǎn)率是非常關(guān)鍵的。
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