食源性興奮劑是指來(lái)源于食品中的興奮劑，包括一般性食品及保健食品中從生產(chǎn)到加工過(guò)程中天然存在或故意添加而殘留的興奮劑成分。運(yùn)動(dòng)員食用含有興奮劑成分的食品，不僅會(huì)對(duì)比賽公平性和個(gè)人名譽(yù)造成損害，還可能對(duì)國(guó)家的形象及食品安全聲譽(yù)造成負(fù)面影響。目前，來(lái)源于肉類(lèi)食品的飲食污染、其他食品或藥物誤服而導(dǎo)致的食源性興奮劑困擾事件層出不窮。
興奮劑禁用清單的修訂與更新始終是WADA（世界反興奮劑機(jī)構(gòu)）及我國(guó)體育運(yùn)動(dòng)管理部門(mén)的重要工作內(nèi)容，禁用清單上所列的興奮劑種類(lèi)與檢測(cè)方法不斷豐富和變化。由WADA頒布的《禁用清單 國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)》（Prohibited List）包括S1～S9的9大類(lèi)具有鎮(zhèn)靜、抑制或掩蔽功能的禁用藥物和3類(lèi)禁用方法。2008年，北京奧運(yùn)會(huì)組委會(huì)根據(jù)WADA制定的標(biāo)準(zhǔn)，依據(jù)國(guó)家認(rèn)監(jiān)委規(guī)定的檢測(cè)項(xiàng)目將食源性興奮劑劃分為4類(lèi)：β2-受體激動(dòng)劑類(lèi)、合成類(lèi)固醇類(lèi)、糖皮質(zhì)激素類(lèi)和玉米赤霉醇類(lèi)，分別對(duì)應(yīng)WADA禁用清單分類(lèi)的S1.蛋白同化制劑、S3. β2-激動(dòng)劑和S9.糖皮質(zhì)激素類(lèi)。
本文采用 QSight 210 液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)建立了對(duì)48種食源性興奮劑的快速定性定量分析方法，根據(jù)保留時(shí)間及離子比率進(jìn)行快速準(zhǔn)確定性，通過(guò)定量離子色譜峰面積所制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行準(zhǔn)確定量，其檢出限完全滿足標(biāo)準(zhǔn)及相應(yīng)的技術(shù)規(guī)范檢測(cè)需求，為檢測(cè)食源性興奮劑提供完整解決方案。
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實(shí)驗(yàn)方法
從全部樣品中取出有代表性樣品可食部分500g，用高速粉碎機(jī)粉碎均勻，均分成兩份作為試樣和留樣，分別裝入潔凈容器中，密封并標(biāo)記，于-18℃保存。
準(zhǔn)確稱(chēng)取2 g（精確至0.01 g）試樣置于50 mL具塞離心管中，加入混合同位素內(nèi)標(biāo)液，渦旋混勻。加入2 mL2%甲酸水溶液和陶瓷均質(zhì)子高速勻漿2 min，加入8 mL甲醇:乙腈 (6:4) 渦旋震蕩5 min，4℃低溫 9000r/min離心5 min。取5 mL上清液，加入到SWCX小柱中重力自流并收集，待液體流干后加入2 mL2%甲酸水：乙腈（2:8）洗脫，抽干小柱，收集所有洗脫液。40℃氮吹至干，準(zhǔn)確加入1 mL水超聲復(fù)溶，過(guò)0.22 μm針式過(guò)濾膜，濾液上機(jī)待分析。
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LC-MS/MS儀器方法
色譜柱：
Quasar SPP C18， 2.1×100mm，2.6μm
柱溫：35℃
流速：0.3 mL/min
進(jìn)樣量：5 μL
表1 48種興奮劑化合物的液相色譜梯度洗脫表
采用珀金埃爾默 QSight 210TM 三重四極桿質(zhì)譜儀進(jìn)行分析，離子源參數(shù)及目標(biāo)化合物質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表2和表3。
表2 質(zhì)譜離子源參數(shù)
表3 正離子模式下的興奮劑類(lèi)化合物及內(nèi)標(biāo)質(zhì)譜參數(shù)列表
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表4 負(fù)離子模式下的興奮劑類(lèi)化合物及內(nèi)標(biāo)質(zhì)譜參數(shù)列表
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結(jié)果與討論
本方法采用一針進(jìn)樣，通過(guò)Time Managed MRM正負(fù)切換模式同時(shí)測(cè)定48種興奮劑化合物，圖1中展示了48種化合物的MRM疊加譜圖。各個(gè)化合物的峰型對(duì)稱(chēng)，并獲得優(yōu)異的色譜分離效果，保證每個(gè)色譜峰上有足夠的采集點(diǎn)數(shù)，以便獲得準(zhǔn)確的結(jié)果及優(yōu)異的重復(fù)性。
圖1 48種興奮劑類(lèi)化合物的MRM疊加譜圖（10ng/ml）
采用上述前處理步驟，用空白基質(zhì)稀釋48種化合物的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，制成 1ng/mL?100 ng/mL 的系列校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)溶液，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，采用內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量分析。其中各個(gè)化合物在線性范圍內(nèi)，線性關(guān)系均較好，相關(guān)系數(shù)R2均大于0.990。同時(shí)考察了檢出限、定量限及6針重現(xiàn)性測(cè)試（見(jiàn)表5），實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該儀器方法對(duì)于測(cè)定48種化合物具有優(yōu)異的線性及重現(xiàn)性。
表5 48種化合物的線性相關(guān)系數(shù)、重現(xiàn)性及檢出限結(jié)果
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結(jié)論
本方法通過(guò)簡(jiǎn)單、方便、可靠的固相萃取前處理方法，對(duì)樣品進(jìn)行提取和凈化。采用軟件已設(shè)置的興奮劑篩查方法，一鍵式實(shí)現(xiàn)興奮劑篩查和定量分析。經(jīng)實(shí)驗(yàn)表明，本方法具有良好的線性關(guān)系，靈敏度高，重現(xiàn)性好等特點(diǎn)完全滿足食源性興奮劑的篩查和定量定性分析要求。
珀金埃爾默 QSight 液質(zhì)聯(lián)用儀：采用創(chuàng)新的離子源，保證最大的離子化，從而保證儀器的靈敏度。結(jié)合離子源主動(dòng)排廢氣設(shè)計(jì)、專(zhuān)利的HSID質(zhì)譜接口以及反吹氣設(shè)計(jì)，確保儀器處于潔凈狀態(tài)，大大提高儀器的抗污染能力，從而獲得高靈敏度，重現(xiàn)性好的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
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