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在這篇工作中，我們采用內(nèi)標(biāo)摻入 SILAC 的定量方法對(duì)大鼠胰島進(jìn)行了蛋白質(zhì)組以及磷酸化蛋白質(zhì)組的定量研究。通過(guò)對(duì) SILAC 培養(yǎng)基的成分比例調(diào)整，我們優(yōu)化了 INS-1E 細(xì)胞的標(biāo)記方法。胰島內(nèi)包含多種細(xì)胞類型，如α細(xì)胞，β細(xì)胞，δ細(xì)胞等，我們發(fā)現(xiàn)采用 INS-1E 細(xì)胞系（一種β細(xì)胞系）已經(jīng)可以較好的覆蓋胰島的全蛋白質(zhì)組和磷酸化蛋白質(zhì)組。若關(guān)心胰島中的α細(xì)胞的話，則可以標(biāo)記α細(xì)胞系來(lái)作為內(nèi)標(biāo)摻入胰島。此外，我們還可以采用多種細(xì)胞系作為內(nèi)標(biāo)，這種稱為“Super SILAC”的方法來(lái)完成對(duì)復(fù)雜組織蛋白質(zhì)的全覆蓋。

在磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)流程中，我們采用了自制的基于StageTip 的TiO2萃取小柱來(lái)靈活的實(shí)現(xiàn)小量樣品的磷酸化肽段富集。樣品量始終是磷酸化以及其他一些翻譯后修飾研究繞不過(guò)去的話題，一般來(lái)說(shuō)只有增加樣品量，并采取適當(dāng)?shù)念A(yù)分級(jí)手段才能更深度的去覆蓋這些翻譯后修飾蛋白質(zhì)組。ThermoFisher 也提供了商業(yè)化的 IMAC 試劑盒（Cat # 88300），鑒于 IMAC 和 TiO2 對(duì)磷酸化肽段富集有著較好的互補(bǔ)性，這兩者聯(lián)用會(huì)對(duì)磷酸化蛋白質(zhì)組的深度覆蓋達(dá)到更好的效果。